Электронная библиотека » Владимир Мирский » » онлайн чтение - страница 17


  • Текст добавлен: 18 мая 2016, 16:01


Автор книги: Владимир Мирский


Жанр: Медицина, Наука и Образование


сообщить о неприемлемом содержимом

Текущая страница: 17 (всего у книги 34 страниц) [доступный отрывок для чтения: 9 страниц]

Шрифт:
- 100% +

Таблица 4.9

Характерные воспалительные процессы у подростков при урогенитальном микоплазмозе (M. hominis, Ureaplasma spp.)


При экспериментальном моделировании уретрита у обезьян с помощью эндоуретрального введения свежевыделенных культур микоплазм и уреаплазм отмечено, что наиболее тяжелые формы уретрита с явлениями восходящей инфекции развиваются при введении смеси данных микроорганизмов (Moller B. R., Freundt E. A., 1983). Возможна этиологическая роль M. hominis и Ureaplasma spp. в развитии острого уретрального синдрома. По крайней мере, у части обследованных пациентов это было доказано W. E. Stamm. Некоторые авторы (Potts J. M. [et al.], 2000) получили подтверждение роли уреаплазм в генезе цистита. Однако существуют и противоположные мнения по поводу этиологии этой разновидности патологии (Лопаткин Н. А. [и др.], 2000; De Campos D. A. [et al.], 1997).

Исследователям удалось выделить Ureaplasma spp. из пузырной порции мочи и из камней прооперированных по поводу уролитиаза. Возбудитель при этом был обнаружен в пузырной порции мочи у 2 – 13 % пациентов с метаболическими камнями и у 16 – 30 % – с инфекционными камнями. Эти результаты экспериментальных исследований на животных подтверждfют теорию о значении уреаплазм в образовании камней мочевого тракта. Исследование возможной связи нефролитиаза с урогенитальной инфекцией, проведенное B. Dewan, показало, что из 70 подростков (мужчин) с почечными камнями у 33 пациентов (47 %) из камней выделены микроорганизмы 38 видов. Из них 14 видов расщепляют мочевину и 24 – не расщепляют. При этом Ureaplasma spp. обнаружена лишь у 2 (2,9 %) пациентов.

Доказана способность Ureaplasma spp. вызывать септические артриты у лиц с гипогаммаглобулинемией, а также реактивные артриты при половом пути заражения (Taylor-Robinson D., Furr P. M., 1997).

Этиологическая роль микоплазм и уреаплазм в возникновении некоторых случаев простатодинии и хронического простатита остается неясной. При исследовании уреаплазмы H. Brunner микробная флора была обнаружена в секрете предстательной железы у 13,7 % из 600 подростков (мужчин) с симптомами простатита. Эти же микроорганизмы были выявлены и у мужчин контрольной группы, но без случаев их локализации в предстательной железе. Проведенное лечение привело к исчезновению уреаплазм и симптомов заболевания у 71 из 82 пациентов. Однако следует отметить, что в исследование не была включена контрольная группа пациентов, принимавших плацебо. Выделение Ureaplasma spp. из предстательной железы у 11 из 131 пациента с хроническим простатитом и отсутствие обнаружения в простатическом секрете этих подростков (мужчин) других микроорганизмов позволили авторам сделать вывод об этиологической роли Ureaplasma spp. в развитии простатита. Этиологическая роль Ureaplasma spp. в формировании простатита подтверждается также и другими авторами (Skerk V. [et al.], 2002; Badalyan R. R. [et al.], 2003). Имеются немногочисленные данные об участии M. hominis (наряду с уреаплазмами) в возникновении данной органной патологии (Shortliffe L. M. [et al.], 1992). Роль M. hominis и Ureaplasma spp. в развитии нарушения фертильности у подростков остается спорной. Отмечено, что у инфицированных пациентов преимущественно за счет снижения подвижности сперматозоидов (метаболические эффекты, прикрепление патогенов к самим сперматозоидам) ухудшается качество спермы (Kohn F. M. [et al.], 1998; Levy R. [et al.], 1999).

Остановимся более подробно на взаимосвязи между двумя видами уреаплазм (U.urealyticum, U. parvum), входящих в состав Ureaplasma spp. и их сероварами, а также выраженностью клинических проявлений микоплазменной инфекции у подростков. Есть немногочисленные данные обследований женщин, показывающие, что U.urealyticum чаще других уреаплазм вызывает воспалительные заболевания органов малого таза и выкидыши. При заражении экспериментальных животных различными видами уреаплазм наибольшая выраженность воспалительного процесса (отечность, гиперемия) в уретре и мочевом пузыре отмечена при использовании штаммов U. parvum. При оценке клеточного состава инфильтрата после заражения четко прослеживалась тенденция, отражающая развитие более агрессивного инфильтрата в ранние сроки при инфицировании животных U. parvum. При анализе величины поврежденных эпителиоцитов по длине базальной мембраны установлено, что при инфицировании U. parvum распространенность гидропической дистрофии уступала величине данного показателя при инфицировании U. urealyticum. Вместе с тем распространенность колликвационного некроза по длине базальной мембраны при использовании U. parvum более чем в три раза превосходила аналогичный показатель при инфицировании U. urealyticum (Кисина В. И. [и др.], 2003). Данные некоторых авторов о возможном участии U. parvum в возникновении патологических процессов в органах малого таза свидетельствуют о полиморфизме уреаплазм в отношении патогенности. Наблюдаемые эффекты U. parvum и U. urealyticum на организм человека попытались сопоставить с патогенностью некоторых сероваров, составляющих изучаемые виды, известные по научным публикациям. Данные мировой литературы по этому вопросу также довольно противоречивы. Установлено, что уреаплазмы, обнаруживаемые у клинически здоровых лиц, в 80 % случаев относятся к 3 серовару, в 10 % случаев – к8именее чемв5%случаев – к4 и 6 сероварам (Jagielski M., 1987). Было клинически и экспериментально подтверждено образование камней под действием уреаплазм различных сероваров (1, 2, 3, 7), находящихся в мочевом пузыре и мозговом веществе почек (Texier J. [et al .], 1984). Имеются данные о серологически подтвержденных случаях внутриутробной респираторной инфекции плода, вызванной уреаплазмами чаще 4, 7, 8 и реже 3 серовара (Smetana Z. [et al.],1994). Так, выделение уреаплазм 3,8и10сероваров из плаценты, легких и церебральной жидкости свидетельствовало о повышенной инвазивности (Watson H. L. [et al.], 1990). Повреждающее действие на хромосомы человеческих лимфоцитов в культуре in vitro наблюдали какв1и6, такив5,7,8 9, 11 и 12 сероварах (Cunha R. A. [et al.], 1997).

Достаточно противоречивыми на сегодня являются данные о патогенетическом значении длительно сохраняющихся антигенов микоплазм. Имеющиеся данные свидетельствуют о том, что такие антигены вызывают определенные патологические изменения в организме (Балабанов Д. Н., 2009). Автором установлено, что антигены уреаплазм и M. hominis выявляются в сыворотке крови пациентов значительно чаще, чем живые клетки и их ДНК в урогенитальном тракте. Получены доказательства существования феномена длительной (до 3 мес.) антигенемии в результате введения лабораторным животным бесклеточных препаратов антигенов U. urealyticum и M. hominis. Антигены могут сохраняться в организме в корпускулярной форме и принадлежать живым и погибшим клеткам микоплазм в виде растворимых макромолекулярных соединений, циркулирующих в крови свободно или в составе иммунных комплексов. В крови пациентов с помощью иммуноблоттинга выявлен широкий спектр специфических антигенов уреаплазм и M. hominis, что подтверждает существование феномена антигенемии у человека.

В последние годы внимание исследователей направлено на изучение апоптоза – генетически запрограммированного процесса гибели клеток. Установлено, что некоторые виды микоплазм через определенные сигнальные молекулы – Toll-like-рецепторы существенно влияют на этот процесс, модулируя активность ряда транскрипционных факторов, и в первую очередь транскрипционного фактора NF-kB, что в результате приводит к нарушению деления клеток: апоптотическому или антиапоптотическому эффекту (Lo S. H. [et al.], 2002). Примером служат апоптотический эффект аргининзависимых микоплазм в Т-лейкемических и лимфобластоидных культурах клеток. Аргениндеиминаза, экспрессируемая в E. coli, индуцирует быстрый апоптоз опухолевых клеток у мышей с трансплантированной опухолью (Щебляков Д. В. [и др.], 2008; Logunov D. Y. [et al.], 2008). Мембранные антигены M. pneumoniaе также сдерживают метастазирование опухоли легких у мышей в эксперименте (Misawa S. [et al.], 1994).

Антиапоптотическим эффектом обладают живые клетки некоторых видов микоплазм и их отдельные липопротеиновые антигены (Sacht G. [et al.], 1998). Они активируют ядерный фактор NF-kB и активаторный белок АР1, что приводит к активации экспрессии ФНО-á, других цитокинов и большой группы генных продуктов, функционирующих вместе для подавления апоптоза. Известно, что апоптоз предотвращает распространение инфекционных агентов и является основным механизмом самопрофилактики онкологических заболеваний.

Таким образом, антигены микоплазм, подавляющие апоптоз, индуцируют развитие хронических инфекционных процессов и оказываются задействованными в опухолевом росте.

О механизмах проапоптотического и антиапоптотического действия микоплазм известно немного. Так, показано, что мембранный липопротеин M. pneumoniae активирует в моноцитах человека NF-kB через TLR1, TLR2 и TLR-6 рецепторы. Активным компонентом является липидная, а не белковая часть молекулы F0F1-АТФазы. Эта АТФаза рассматривается как потенциальная молекула для предотвращения и терапии респираторного микоплазмоза (Shimizu T. [et al.], 2005; Shimizu T. [et al.], 2007). У M. fermentans активацию апоптоза вызывает поверхностный липопротеин со структурой S-(2, 3-дигидроксипропил) – цистеин (Garcia J. [et al.], 1998; Hall R. [et al.], 2000; Rawadi G. [et al.], 1999). Липопротеины взаимодействуют с TLR-2 и TLR-6 рецепторами на мембране клетки хозяина, что приводит к активации каскада реакций, связанных с апоптозом. Эндонуклеазы, находящиеся на мембране микоплазм, также могут индуцировать апоптоз. Так, эндонуклеаза M. penetrans P40 индуцирует апоптоз в культурах лимфоцитарных клеток (Bendjennat M. [et al.], 1999; Feng S. H. [et al.], 1999; Paddenberg R. [et al.], 1998). Эндонуклеазы микоплазм могут проникать в клетку путем взаимодействия с поверхностными рецепторами клетки или во время самого апоптоза.

О влиянии урогенитальных микоплазм и их антигенов на процесс апоптоза сведений очень мало. Однако известно, что M. hominis и U. urealyticum могут быть причиной нестабильности генома: они вызывают хромосомные аберрации в культуре лимфоцитов и лейкоцитов человека (Kundsin R. [et al.], 1971; Lo S. H. [et al .], 2002). Некоторые виды микоплазм или антигенов убитых клеток вызывают апоптоз инфицированных клеток. Так, антигены M. genitalium индуцируют апоптоз путем активации NF-kB в клеточной линии TH-1 (Qiu H. [et al.], 2007). Такой же эффект оказывают M. hominis и M. salivarum в клетках 32D (Hopfe M. [et al.], 2008; Zhang Sh., Lo S. C., 2007). Описан апоптотический эффект U. urealyticum в эпителиальных клетках легкого и макрофагах у недоношенных детей с острым и хроническим заболеванием легких и при бронхолегочной дисплазии в хронической стадии (Li Y. H. [et al.], 2002). Закономерно предположить, что генетическая нестабильность генома на фоне подавления апоптоза может завершиться малигнизацией инфицированных клеток. Подтверждением этому являются данные Feng S. H., Lo S. C. (1999) и Tsai S. [et al.] (1995).

Таким образом, микоплазмы, не несущие трансформирующих генов и не интегрирующие свой геном в геном эукариотической клетки, оказываются причастными к развитию онкологических процессов. При этом ключевая роль принадлежит мембранным антигенам липопротеиновой природы и, возможно, эндонуклеазам.

Вторым очень важным эффектом мембранных антигенов микоплазм является их перекрестная реакция с мембранами клеток эукариот. Хорошо известен факт серологического родства антигенов M. arthritidis с антигенами различных тканей крысы, в том числе с хондроцитами (Cahill J. [et al.], 1971). Высокоиммуногенные гликолипиды мембран M. pneumoniae реагируют с антигеном Ii эритроцитов человека. Мембранные антигены M. pneumoniae родственны антигенам некоторых тканей человека: мозга, поджелудочной железы, печени, легкого. Перекрестные реакции между антигенами микоплазмы и антигенами тканей индуцируют синтез аутоантител. Тяжесть инфекционного процесса во многом определяется уровнем аутоантител к инфицированным тканям и степенью вовлечения органов в аутоиммунный процесс. Аутоантитела связываются с гомологичными тканевыми антигенами, к ним присоединяются компоненты комплемента, и образовавшиеся иммунные комплексы повреждают клеточные мембраны и вызывают местное воспаление (Горина Л. Г. [и др.], 2006; Прозоровский С. В. [и др.], 1995). Иммунопатологические реакции, обусловленные наличием перекрестно-реагирующих антигенов – один из механизмов патогенеза респираторного микоплазмоза и других микоплазменных инфекций.

Перекрестно-реагирующие антигены обнаружены у M. hominis и лейкоцитов, сперматозоидов, тканей тестикул и яичника человека (Mathur S. [et al.], 1985). Частота выявления перекрестно-реагирующих антигенов коррелирует с частотой бесплодия мужчин и женщин. Перекрестно-реагирующие антигены обнаружены также у U. urealyticum и сперматозоидов человека. В уреаплазме это антигены с молекулярной массой 61, 50 и 25 кДа. У сперматозоидов это ядерный белок NASP. Он был синтезирован и к нему получены АТ. Эти АТ, а также АТ к уреазе уреаплазмы (UreG) подавляли прикрепление сперматозоидов к яйцеклетке в опытах на мышах; 75 % подопытных самок становились бесплодными (Shi J. [et al.], 2007).

Выше приводились сведения о способности убитых клеток микоплазм индуцировать артриты у мышей и кроликов при внутрисуставном введении. При этом у животных, предварительно сенсибилизированных антигенами убитых клеток, артриты носили более тяжелый характер. Антигены в составе иммунных комплексов длительно сохранялись в синовии и хряще. Авторы пришли к убеждению, что сохранение перекрестно-реагирующих антигенов создает иммунный фон для хронизации процесса (Washburn L. [et al.], 1980; 1982).

Микоплазмы и их отдельные мембранные антигены оказывают существенное влияние на синтез некоторых цитокинов, играющих важную роль в индукции воспалительной реакции. Так, при исследовании транскрипции генов 38 цитокинов в культуре цервикальных и эпителиальных клеток простаты in vitro было установлено, что из испытанных видов микоплазм человека наиболее значительные изменения вызывала M. fermentans. Некоторые изменения были транзиторными, другие сохранялись в течение всего срока наблюдения – 9 мес. (Zhang S. [et al.], 2000).

Определена природа активных в отношении цитокинов мембранных субстанций. У M. fermentans это липопротеин с молекулярной массой 43 кДа. Он активирует ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-10, ИЛ-12 в моноцитах и макрофагах человека (Colin R. [et al.], 2000; Matsumato M. [et al.], 2000). Липопротеины M. hominis Р50 и Р100 индуцируют синтез ИЛ-8 в макрофагах человека, а при микоплазменной инфекции мышей активируют синтез ИЛ-6 и ИФН-γ. Причем при смешанной инфекции с другими бактериями уровень этих ИЛ значительно выше, чем при моноинфекциях (Kim K. [et al.], 2000). M. hominis индуцирует синтез ИЛ-8 в альвеолярных эпителиальных клетках (Kruger T., Baier J., 1997), а ИЛ-10 – в дендритных клетках человека (Scott K. [et al.], 2005). Антигены M. pneumoniae, напротив, активируют продукцию ИЛ-10, но подавляют синтез ИЛ-4 в клетках селезенки мыши (Chang M. – W. [et al.], 2000). Активирующий эффект проявляли только штаммы, прикрепляющиеся к стеклу и, следовательно, имеющие адгезин глик опротеиновой природы.

Внутриутробная инфекция U. urealyticum сопровождается значительным увеличением концентрации ИЛ-8 в амниотической жидкости и крови пупочного канатика (Witt A. [et al.], 2005), а в крови детей с низкой массой тела (1250 г), инфицированных U. urealyticum, отмечается увеличение концентрации провоспалительных цитокинов ФНО-á и ИЛ-8, а также подавление выработки ИЛ-6 и противовоспалительного ИЛ-10 (Manimtim W. [et al.], 2001), что способствует развитию хронического воспаления и созданию условий для вторичной инфекции. В мононуклеарах синовиальной жидкости у пациентов с ревматоидным артритом и другими заболеваниями суставов уровень ИЛ-10 был увеличен у 82,2 % больных, ИЛ-4 – у 17 %. Индукция цитокинов воспаления липопротеинами микоплазм – одно из звеньев патогенеза заболеваний суставов, ассоциированных с микоплазмами (Horowitz Sh. [et al.], 2000).

Практически все изученные активаторы синтеза цитокинов микоплазм являются липопротеинами. Они обнаруживаются у микоплазм почти с такой же частотой, как ЛПС у бактерий. У микоплазменных липопротеинов есть уникальная NH2-терминальная аминокислота N-ацил-S-диацилглицерин-цистеин со свободным N-концом, связывающаяся с Toll-like-рецепторами и CD-14, которая и определяет высокую активность микоплазм в отношении синтеза цитокинов. Перитонеальные макрофаги, дефектные по этим рецепторам, и незрелые дендритные клетки человека не связываются с липопротеинами и не секретируют ФНО и ИЛ-12. Липопротеины через сигнальные Toll-like-рецепторы активируют транскрипционный ядерный фактор NF-kB и активаторный белок А-1. Тоll-like-рецепторы способны распознавать эволюционно консервативные молекулярные структуры микоплазм, в результате чего через адапторные молекулы MyD88, TRAF6 и каскад киназ происходит активация транскрипционного фактора NF-kB, который в свою очередь обеспечивает экспрессию генов цитокинов, генов, контролирующих клеточную дифференцировку, выживаемость и пролиферацию, регулируя тем самым врожденный и адаптивный иммунный ответ. При этом значительно обогащается секреция ФНО и других цитокинов (Muhlradt P., 2002).

Убитые нагреванием клетки микоплазм и микоплазменные липопротеины могут вызывать и другие эффекты, не связанные с синтезом цитокинов. MALP-2 – липопротеид, обнаруженный впервые у M. arthritidis, а затем у многих других видов микоплазм, стимулирует, а затем подавляет экспрессию антигенов класса II ГКС на перитонеальных макрофагах, что приводит к подавлению презентации антигенов. Микоплазменные липопротеины регулируют экспрессию молекулы межклеточной адгезии (ICAM-1) (Dong L. [et al.], 1999), способны активировать комплемент, стимулировать резорбцию костной ткани.

Лабораторная диагностика урогенитального микоплазмоза

При проведении обследования подростка на наличие инфекции необходимо обязательное обследование полового партнера, так как по результатам наших исследований в парах, продолжительно (в течение трех месяцев и более) ведущих половую жизнь без применения барьерных методов контрацепции, клинико-лабораторные тесты по микоплазменной инфекции чаще определялись у женщин (Рищук С. В. [и др.], 2002). При этом доказано, что отрицательные лабораторные тесты по микоплазмам у подростков не являются убедительным доказательством отсутствия у них инфекции. При подтверждении диагноза хронический урогенитальный микоплазмоз у одного из половых партнеров (чаще женского пола) при половой жизни пары около трех месяцев и более без применения барьерных методов контрацепции доказано обязательное инфицирование другого партнера (Рищук С. В. [и др.], 2002; Рищук С. В., Костючек Д. Ф., 2005). В связи с этим мы будем освещать особенности диагностических подходов по микоплазменной инфекции как у подростков (мужчин), так и у девушек (женщин).

Для выявления урогенитальных микоплазмозов разработаны и апробированы различные лабораторные методы диагностики. К методам специфической диагностики относятся микроскопический, культуральный, генодиагностика и серодиагностика.

Из-за малых размеров и низкой восприимчивости к обычным красителям традиционные методы бактериоскопического исследования неприменимы при диагностике микоплазмозов. Попытка применить для этой цели люминесцентную микроскопию с окраской препаратов флюорохромами (например, акридиновым оранжевым) не получила широкого признания из-за низкой чувствительности. Однако некоторые авторы считают этот подход весьма эффективным при обнаружении Ureaplasma spp., адсорбированных на сперматозоидах (Прозоровский С. В. [и др.], 1995).

В нашей стране большие надежды в диагностике микоплазменной инфекции связывали с ПИФ. Препараты для этой цели выпускал целый ряд отечественных компаний: «МикоСлайд», «УреаСлайд» (АО «Лабдиагностика, Москва), «МикоГомоФлюоСкрин», «УреагениФлюоСкрин» (СП «Ниармедик», г. Москва). Эти диагностические наборы содержат меченые флюоресцеина изотиоцианатом (ФИТЦ) поликлональные кроличьи антитела к видоспецифическим антигенам M. hominis и Ureaplasma spp.

В то же время ПИФ используется значительно реже, чем при диагностике других урогенитальных инфекций, например хламидиоза. Это связано с особенностями антигенного строения представителей семейства Mycoplasmataceae (Thirkill C. E., Kenny G., 1975). Известно, что наибольшей иммуногенностью из компонентов бактериальной стенки обладает клеточная стенка, которая как раз и отсутствует у микоплазм. Кроме того, характерной особенностью микоплазм является высокий уровень их внутривидовой антигенной гетерогенности и лабильности. Кроме того, для них характерны общие антигены с мембранами клеток-мишеней. Все это затрудняет производство клона при использовании техники МКАТ и обусловливает высокую вероятность неспецифических реакций. Возможно, этим обстоятельством объясняется тот факт, что ведущие зарубежные микробиологические и иммунологические компании не производят препаратов для диагностики микоплазмозов в РИФ. Метод получил в целом отрицательную оценку и в работах некоторых отечественных авторов (Белоусова Е. В., 1999).

Вследствие регрессивного характера эволюции имеющие медицинское значение микоплазмы утратили целый ряд ферментов и ферментативных систем, подавляющее большинство которых удается культивировать на питательных средах. Это делает возможным использование культурального метода для диагностики микоплазмозов и уреаплазмозов. Для этого исследования берут пробы со слизистой уретры (Лисин В. В. [и др.], 1988). Пробы мочи для выделения микоплазм предпочтительно брать из первой утренней порции – «середину струи». При подозрении на микоплазменный или уреаплазменный простатит следует получить для посева секрет предстательной железы.

Микоплазмы высокочувствительны к воздействию факторов внешней среды (Прозоровский С. В. [и др.], 1995; Vrazquez F. [et al.], 1995), поэтому доставка материала должна осуществляться в кратчайшие сроки. Специальные среды для транспортировки этой группы микроорганизмов не разработаны. Обычно доставку проб осуществляют в жидкой питательной среде. Для этих целей возможно использование среды 199, обогащенной лошадиной сывороткой и дрожжевым экстрактом. В зависимости от конкретной схемы исследования, в дальнейшем проводят высев на плотную или на жидкую среду из транспортного бульона или его разведений. В некоторых современных диагностических системах, например «Mycoplasma IST», «Mycoplasma LYO» («BioMerieux», Франция), для транспортировки используют основу уреааргининового бульона (R1). При этом сроки транспортировки могут составлять 4 – 5 ч при комнатной температуре или до 2 сут. при условии хранения пробы при 4 °C.

Для реализации культурального метода диагностики могут быть использованы жидкие и/или плотные питательные среды. В настоящее время ассортимент питательных сред для этих целей достаточно широк, причем многие из них выпускаются промышленными способами. Как плотные, так и жидкие среды для первичного выделения Mycoplasmataceae часто наделяют дифференцирующими свойствами. В качестве диффернцирующих факторов используют моносахариды, например глюкозу, мочевину, аминокислоту и аргинин.

Для выявления M. hominis, как правило, используют способность этих микроорганизмов к ферментации аргинина. Способность к расщеплению мочевины является ключевым признаком для дифференциации уреаплазм на жидких питательных средах. Образующийся аммиак сдвигает рН среды в щелочную сторону, что легко выявляется с помощью индикатора. В плотные питательные среды в качестве дифференцирующего субстрата также включают MnSO4. Рост на этих средах Ureaplasma spp. сопровождается образованием MnO2, окрашивающим колонии этих микроорганизмов в коричневый цвет, в то время как колонии микоплазм остаются бесцветными. Для подавления роста сопутствующей микрофлоры к питательным средам добавляют антибиотики. Для этого используют группу пенециллинов и цефалоспоринов, к которым микоплазмы и уреаплазмы резистентны.

Использование плотных питательных сред в условиях практических лабораторий затрудняет ряд обстоятельств, важнейшим из которых является необходимость использования микроаэрофильных условий инкубации. Это связано с тем, что при культивировании микоплазм из-за укороченности электронтранспортных цепей, оканчивающихся флавиновыми ферментами, в питательных средах накапливается большое количество токсичных для клеток перекисных соединений. Для создания микроаэрофильных условий приходится использовать специальное оборудование и газогенерирующие пакеты, что существенно удорожает исследование. Кроме того, колонии микоплазм, а особенно уреаплазм, на плотных питательных средах малы, что требует применения для учета результатов микроскопа. При культивировании микоплазм на жидких средах можно создать анаэробные условия, наслоив на поверхность среды стерильное минеральное масло. Учет результатов часто производят по изменению цвета среды.

В России для диагностики микоплазмоза и уреаплазмоза широкое распространение получила ПЦР. При этом для выявления в пробе Ureaplasma spp. часто используют праймеры к гену уреазы, а для M. hominis – ген аргининдезаминазы (Бурменская О. В. [et al.], 1998).

В последние годы для определения обсемененности микоплазмами половых путей, как и при хламидийной инфекции, начали успешно применять ПЦР в реальном времени (real-time PCR) (Bustin S. A., 2000; Zhang W. [et al.], 2002; Storm M. [et al.], 2005). Метод предназначен для качественного и количественного определения M. hominis и Ureaplasma spp. Принцип и достоинства метода описаны в разделе по хламидийной инфекции. Несмотря на то что real-time PCR является количественным тестом, она имеет те же ограничения, что и обычная (качественная) PCR. Они связаны с доступностью возбудителя для исследования при хронизации инфекции. Кроме того, количество копий ДНК в первичных половых путях далеко не всегда отражает истинную картину обсемененности других органов репродуктивной системы, из которых взятие материала практически невозможно. Отсутствует прогностическая значимость различных показателей копий ДНК в плане определения причинно-следственной связи между возбудителем и очагом инфекции (в случае посева на питательные среды эти критерии установлены). Отсутствует стандартизация при заборе материала из половых путей (особенно из мужской уретры и эндоцервикса).

В настоящее время разработаны и с успехом используются методы выявления антигенов микоплазм и уреаплазм в сыворотке крови и других субстратах – РАГА, ИФА, РИФ (Лисин В. В. [и др.], 1988). Однако для реализации этих методов необходимо наличие стандартных наборов антисывороток к разным серотипам возбудителя. Предложенные отечественными производителями наборы для ПИФ не получили высокой оценки при проведении испытаний в условиях практического здравоохранения (Белоусова Л. В., 1999).

Для диагностики микоплазмозов и уреаплазмозов неоднократно предлагалось использовать серодиагностику, чаще всего РСК, РИМ, РПГА, ИФА (Лисин В. В. [и др.], 1988). Сопоставление различных методов показало низкую эффективность серологии (по сравнению с ПЦР и культуральным тестом) в выявлении урогенитальных микоплазм (Levy R. [et al.], 1999). По мнению С. В. Прозоровского, в связи с тем что гуморальные антитела к M. hominis и Ureaplasma spp. могут присутствовать у клинически здоровых лиц, а инфицирование людей Ureaplasma spp. не всегда сопровождается повышением уровня специфических антител, методы серологического их выявления эффективны лишь в определенных, как правило острых, случаях.

Неоднократно выполняемые работы по сопоставлению сравнительной эффективности отдельных методов диагностики зачастую давали противоречивые результаты. Поэтому авторы рекомендуют использовать комплекс методов, так как это повышает достоверность обследования. При сравнительном изучении ПЦР и гибридизации in situ при выявлении Ureaplasma spp. и M. hominis с различными урогенитальными синдромами практически во всех образцах они дали сходные результаты (Fernandez C. [et al .], 1998). Проведено сравнительное выявление Ureaplasma spp. в выделениях 618 пациентов (165 мужчин и 453 женщин) методом ПЦР с ингибиторным контролем и культуральным методом. У мужчин чувствительность ПЦР по сравнению с культуральным методом составила 64, а специфичность – 99 %; у женщин – 84 и 98 % соответственно. При этом 80 % ПЦР-положительных образцов содержали U. parvum,13,5 % – U. urealyticum и 6,5 % – оба вида (Povlsen K. [et al.], 1998). Сравнение эффективности серологических методов выявления уреаплазм в ПЦР и культурального метода показало неэффективность определения АТ (Levy R. [et al.], 1999).

Помимо методов, основанных на выявлении возбудителя в материале, разработан тест для выявления негонококкового уретрита, основанный на определении эстеразы в лейкоцитах мочи, количество которой коррелирует с числом лизированных клеток в осадке мочи. Тест оказался чувствительным в 96 – 100 % случаев и специфичным в 55 – 52,8 % (Veeravahu M. [et al.], 1987). Обследование контингента с воспалительными заболеваниями гениталий показало, что при клинически выраженных случаях заболевания, вызванных Ureaplasma spp., повышается уровень ЦИК и естественных АТ, в то время как при бессимптомном носительстве уреаплазм эти показатели находятся в пределах нормы (Фейзулла М. Ф. [и др.], 1988). Теория универсального управления системой распознавания Кульберга (Кульберг А. Я., 1987) открыла новые возможности для выявления лиц с различными патологическими изменениями, связанными с инфекционными процессами и приводящими к нарушению гомеостаза. Согласно этой теории, основную функцию регуляции гомеостаза выполняют участки мембранных рецепторов – R-белки. В свете этой теории количество рецепторов на мембране и их топология преобретают особое значение. Будучи мембранными паразитами, микоплазмы вызывают изменения в рецепторном аппарате клеточных мембран, что может привести к повышению уровня внеклеточного R-белка и нарушению гомеостаза. По данным НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи, микоплазменные инфекции, вызванные M. hominis и Ureaplasma spp., сопровождаются значительным повышением титров R-белка. Определение его количества при массовом обследовании пациентов, бесспорно, способствует выявлению лиц с урогенитальными инфекциями, в том числе микоплазменной и уреаплазменной природы.


Страницы книги >> Предыдущая | 1 2 3 4 5 6 7 8 9
  • 0 Оценок: 0

Правообладателям!

Данное произведение размещено по согласованию с ООО "ЛитРес" (20% исходного текста). Если размещение книги нарушает чьи-либо права, то сообщите об этом.

Читателям!

Оплатили, но не знаете что делать дальше?


Популярные книги за неделю


Рекомендации