Текст книги "Раневой процесс: нанобиотехнологии оптимизации"

C целью расширения возможности выполнения органосохраняющих операций при травме паренхиматозных органов и быстрой окончательной остановки профузных кровотечений нами разработан способ дозированной внешней компрессии с помощью биосовместимых и деградирующих в динамике компрессионных пластин (Бояркин М. Н., 2008; Попов В. А., 2008).

Из биополимеров, полностью биодеградирующих в организме, для изготовления компрессионных пластин мы выбрали два препарата: коллаген и продукт его гидролиза – желатин. Данные биополимеры являются структурными компонентами живых тканей, полностью деградируют в организме и водорастворимы. С целью повышения эластических свойств и замедления сроков биодеградации компрессионных пластин в состав исходной композиции было решено включить также поливиниловый спирт (ПВС) – синтетический гидрофильный биодеградирующий полимер и глицерин.

ПВС-коллаген-желатиновые пластины получали путем растворения поливинилового спирта и глицерина в физиологическом растворе с введенными в него антибактериальными препаратами (гентамицин, хлоргексидин) и кластера фуллерена С₆₀/ПВП (табл. 9). Отдельно полностью растворяли желатин и коллаген также в физиологическом растворе.

Таблица 9

Состав ПВС-коллаген-желатин-фуллереновых пластин

После этого оба раствора смешивали между собой. Полученную смесь заливали в пластиковые формы и высушивали при температуре 18 °C в течение трех суток. Через двое суток происходило образование плотных, умеренно эластичных пластин светло-желтого цвета (рис. 7). После полного высушивания в полученных пластинах по средней линии создавали четное количество перфорационных отверстий диаметром 2 мм и с шагом в 10 мм для проведения через них П-образных гемостатических швов. Толщина пластин составляла около 3 мм, длина – 9 см, ширина – 1,0 – 1,5 см. ПВС-коллаген-желатиновые пластины упаковывали в двойную полиэтиленовую упаковку и стерилизовали гамма-облучением.

Рис. 7. ПВС-коллаген-желатиновые пластины

Включение в состав исходной смеси кластера фуллерена С₆₀/ПВП существенно влияло на физические свойства компрессионных пластин, повышая их эластичность и плотность. Физические свойства разработанных нами пластин представлены в табл. 10.

Таблица 10

Влияние кластера фуллерена C₆₀/ПВП на физические свойства коллагеновых компрессионных пластин

Дозированную внешнюю компрессию с целью остановки профузных кровотечений с использованием компрессионных ПВС-коллаген-желатин-фуллереновых пластин выполнили у 4 собак при краевой резекции печени, при резекции верхнего полюса селезенки – у6собак. Во всех наблюдениях компрессионные пластины располагалив1смоткрая раны паренхиматозного органа с двух сторон и фиксировали их П-образными швами, проведенными с помощью обычной печеночной иглы через перфорационные отверстия пластин.

При операциях было установлено, что ПВС-коллаген-желатиновые пластины обладают достаточной эластичностью, легко адаптируются к неровной поверхности паренхиматозных органов, не прорезываются под швами и обеспечивают равномерную компрессию тканей вблизи раны. Во всех наблюдениях дозированная внешняя компрессия с помощью ПВС-коллаген-желатиновых пластин позволяла быстро снизить интенсивность профузного кровотечения и перевести его до уровня паренхиматозного. Паренхиматозное кровотечение останавливали желатиновой губкой «Гемасепт». Окончательный гемостаз был достигнут во всех наблюдениях, вторичного кровотечения в послеоперационном периоде отмечено не было. Животных выводили из опыта на 7-е и 14-е сутки.

Рис. 8. Реакция тканей селезенки собаки при применении ПВС-коллаген-желатиновых пластин:

а – на 7-е сутки; б – на 14-е сутки. Окраска гематоксилин-эозином, ув. × 250

Гистологические исследования тканей, полученных из зоны операции, показали, что на 7-е сутки в печени экспериментальных животных происходило формирование молодой грануляционной ткани с наличием тонкостенных сосудов вокруг пластин и постепенная фрагментация и деградация пластин. В селезенке признаки воспаления отсутствовали. Вокруг пластин также наблюдали формирование молодой грануляционной ткани. К 14-м суткам в тканях печени и селезенки признаков воспалительной реакции не обнаружено. В печени в молодой соединительной ткани наблюдали врастание тяжей вновь образованных гепатоцитов вокруг отдельных фрагментов пластин. В гепатоцитах отмечена умеренно выраженная зернистая дистрофия. В тканях селезенки выявлены единичные фрагменты пластин и процесс их замещения соединительной тканью (рис. 8).

Гистологическое исследование тканей печени и селезенки показало, что ПВС-коллаген-желатин-фуллереновые пластины практически полностью биодеградируют в организме экспериментальных животных к 14-м суткам, замещаясь соединительными тканями и не вызывая воспалительного процесса.

Глава 2
ОБЩЕРЕЗОРБТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ КЛАСТЕРОВ ФУЛЛЕРЕНА ПРИ ИХ ПАРЕНТЕРАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ

Изучение общерезорбтивных (общетоксических) свойств различных водорастворимых форм фуллерена С₆₀ является важной задачей в исследовании их влияния на биологические системы. Это обусловлено, во-первых, недостаточным количеством данных в литературе об исследовании токсических свойств наиболее часто применяемого кластера С₆₀/ПВП; во-вторых, противоречивостью опубликованных результатов, что связано с формой водорастворимого фуллерена, используемого в эксперименте, и непосредственно с технологией синтеза, так как при этом используют токсичные вещества, и при недостаточной очистке от них в опыте возможно получение спорных результатов. В-третьих, как уже упоминалось, разные формы водорастворимого фуллерена могут иметь свои особенности распределения и проявления активности в организме, т. е. оказывать различное токсическое действие на живые системы. Обращают на себя внимание публикации о негативном действии ПВП при его парентеральном введении. ПВП, являясь синтетическим полимером, плохо элиминируется из организма и кумулируется в печени, костном мозге, почках, строме легких, сердца, половых органах с локализацией в цитоплазме макрофагов, а также внеклеточно, приводя к развитию тезаурисмозов. Отмечено, что ПВП вызывает выраженные расстройства кровообращения в сердце и печени в ранние сроки после введения препарата.

Исходя из важности вышеперечисленных обстоятельств, с помощью морфологических и биохимических методов нами были изучены общерезорбтивные свойства кластера С₆₀/ПВП.

Общерезорбтивные свойства кластера С₆₀/ПВП исследовали при различных вариантах системного введения – внутрибрюшинном и внутривенном. При внутрибрюшинном варианте введения кластера С₆₀/ПВП проводили гистологические исследования тканей внутренних органов (головной мозг, легкие, сердце, печень, селезенка, почки) и биохимические исследования активности мембранных ферментов – сахаразы, мальтазы, аминопептидазы М, щелочной фосфатазы, глицил-L-лейциндипептидазы в полых (тонкая кишка) и паренхиматозных (печень, почка) органах брюшной полости, изучена динамика содержания в тканях указанных органов общего белка. В эксперименте при внутривенном введении препарата оценивали морфологические изменения в тканях внутренних органов (головной мозг, легкие, сердце, печень, селезенка, почки) и исследовали изменения основных биохимических показателей сыворотки крови (креатинин, глюкоза, общий белок, аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ), гамма-глутаматтранспептидаза (ГГТП)).

Общерезорбтивное действие кластера С₆₀/ПВП при внутрибрюшинном введении исследовано в опытах на 70 крысах линии Вистар весом 180 – 200 г. Животные были разделены на 7 групп. Крысы 1-й группы являлись интактными и служили контролем. Крысам 2, 3 и 4-й групп внутрибрюшинно соответственно вводили по 1 мл 10 % водного раствора ПВП, 10 % водного раствора кластера С₆₀/ПВП и 25 % водного раствора кластера С₆₀/ПВП. Животных 2 – 4-й групп выводили из опыта на 3-и сутки после введения препаратов. Крысам 5, 6 и 7-й групп вводили те же препараты в аналогичной дозе и выводили из опыта на 7-е сутки.

Результаты исследования активности мембранных ферментов и динамики содержания общего белка в тканях тонкой кишки, печени и почек приведены в табл. 11.

Известно, что активность исследованных ферментов находится в определенном интервале нормы, и при различных видах патологии (гипоксия, ишемия органа и др.) ее показатели могут существенно изменяться, указывая на повреждение клеточных структур.

Представляем дифференцированную трактовку выявленных изменений по каждому ферменту.

Сахараза. Из табл. 11 видно, что у интактных животных активность этого фермента в слизистой тонкой кишки составила 3,2 ± ± 0,7 мкмоль/мин на грамм ткани, что соответствует показателям нормы у крыс. Установлено, что внутрибрюшинное введение 10 % водного раствора ПВП, 10 % водного раствора кластера С₆₀/ПВП и 25 % водного раствора кластера С₆₀/ПВП изменяет активность сахаразы в тонкой кишке на 3-и сутки – до уровня 3,9 ± 0,4; 3,3 ± 0,4; 3,8 ± 0,5 мкмоль/мин и на 7-е сутки – до уровня 3,6 ± 0,5; 4,3 ± 0,3;

5,1 ± 0,4 мкмоль/мин соответственно. В печени и почках активность данного фермента не определялась. Таким образом, на 3-и сутки после введения растворов ПВП и кластера С₆₀/ПВП не происходило достоверных изменений активности сахаразы. На 7-е сутки отмечено достоверное увеличение активности фермента до 5,1 ± ± 0,4 мкмоль/мин только при введении 25 % водного раствора кластера С₆₀/ПВП против 3,2 ± 0,4 мкмоль/мин у интактных животных. В других опытных группах на 7-е сутки после аппликации показатель находился в интервале нормы.

Таблица 11

Активность (в мкмоль/мин на грамм ткани) мембранных ферментов и содержание белка в печени и почках, слизистой тонкой кишки после внутрибрюшинного введения водных растворов ПВП и С₆₀/ПВП

* p < 0,05 по сравнению с интактными.

** p < 0,05 при сравнении показателей активности после введения 10 % раствора и 25 % раствора С₆₀/ПВП.

Группы животных:

1 – интактные;2 – на 3-и сутки после введения 10 % водного раствора ПВП;3 – на 3-и сутки после введения 10 % водного раствора С₆₀/ПВП;4 – на3-исутки после введения 25 % водного раствора С₆₀/ПВП; 5 – на 7-есутки после введения 10 % водного раствора ПВП; 6 – на 7-е сутки после введения 10 % водного раствора С₆₀/ПВП; 7 – на 7-е сутки после введения 25 % водного раствора С₆₀/ПВП.

Мальтаза. Из табл. 11 видно, что у интактных животных активность этого фермента в слизистой тонкой кишки составляет 30,9 ± ± 4,8 мкмоль/мин на грамм ткани, в печени – 1,1 ± 0,3 мкмоль/мин, в почках – 27,0 ± 5,2 мкмоль/мин, что соответствует показателям нормы у крыс.

В ответ на введение 10 % водного раствора ПВП, 10 % водного раствора кластера С₆₀/ПВП и 25 % водного раствора кластера С₆₀/ПВП через 3 суток показатель активности мальтазы в слизистой тонкой кишки не изменился и составил 31,1 ± 3,4; 28,0 ± 3,8; 29,4 ± ± 3,8 мкмоль/мин соответственно. На 7-е сутки изменение активности в сторону повышения до уровня 50,1 ± 6,7 мкмоль/мин отмечено только при введении 25 % раствора С₆₀/ПВП. В тканях печени и почек во всех опытных группах зарегистрированы незначительные колебания активности фермента без характерной динамики в пределах активности фермента у интактных животных (рис. 9).

Щелочная фосфатаза. Из табл. 11 видно, что у интактных животных активность данного фермента распределена в слизистой тонкой кишки в пределах 6,6 ± 1,5 мкмоль/мин на грамм ткани, в печени – 0,2 ± 0,02 мкмоль/мин, в почках – 2,8 ± 0,4 мкмоль/мин, что соответствует показателям нормы у крыс. Активность щелочной фосфатазы во всех исследованных органах после введения препарата в разных дозах не изменялась.

Аминопептидаза М. Из табл. 11 видно, что у интактных животных активность данного фермента составила в слизистой тонкой кишки 4,6 ± 0,6, в печени – 1,4 ± 0,2, в почке – 19,6 ± ± 2,3 мкмоль/мин на грамм ткани, что соответствует показателям нормы у крыс. Установлено, что активность аминопептидазы М в слизистой тонкой кишки достоверно повышалась до уровня 9,1 ± ± 0,4 мкмоль/мин на 7-е сутки на фоне введения 10 % раствора ПВП, в остальных опытных группах показатель активности находился на уровне 3,5 – 4,5 мкмоль/мин на грамм ткани, соответствуя показателю у интактных животных. В печени была отмечена следующая динамика изменения активности фермента: на 3-и сутки в ответ на введение препаратов активность не изменялась, на 7-е сутки незначительное повышение активности до 2,6 ± 0,2 мкмоль/мин было зарегистрировано в ответ на введение 10 % раствора С₆₀/ПВП. Активность фермента в тканях почек на 3-и сутки после введения 10 % раствора ПВП составила 26,9 ± 1,9 мкмоль/мин, при введении 10 % раствора С₆₀/ПВП – 17,7 ± 1,4 мкмоль/мин и при введении 25 % раствора С₆₀/ПВП – 13,6 ± 0,3 мкмоль/мин. На 7-е сутки было отмечено повышение активности в группах с введением 10 и 25 % растворов С₆₀/ПВП до 30,9 ± 1,7 и 29,2 ± 2,4 мкмоль/мин соответственно. Активность в группе с введением 10 % раствора ПВП оставалась на том же уровне и составляла 25,1 ± 1,4 мкмоль/мин (рис. 10).

Рис. 9. Активность мальтазы в слизистой тонкой кишки (а), почках (б) и печени (в) в % к контролю

Глицил-L-лейциндипептидаза. Из табл. 11 видно, что у интактных животных ее активность распределена в верхней трети тонкой кишки в пределах 69,5 ± 12,9, в печени – 38,6 ± 4,9, в почках – 142,1 ± 18,6 мкмоль/мин на грамм ткани, что соответствует показателям нормы у крыс. Введение 10 % растворов ПВП и С₆₀/ПВП вызывало уменьшение активности глицил-L-лейциндипептидазы на 40 – 50 % в слизистой тонкой кишки на 3-и сутки после аппликации с последующим восстановлением показателя к 7-м суткам. При введении 25 % раствора С₆₀/ПВП к 3-м суткам отмечено повышение активности фермента в гомогенатах печени до 68,2 ± ± 5,0 мкмоль/мин (относительно 38,6 ± 4,9 у интактных животных) и к 7-м суткам в гомогенатах почки до 281 ± 21,0 мкмоль/мин (относительно 142,1 ± 23,8 у интактных животных) (рис. 11).

Рис. 10. Активность аминопептидазы М в слизистой тонкой кишки (а), почках (б) и печени (в) в % к контролю

Рис. 11. Активность глицил-L-лейциндипептидазы в слизистой тонкой кишки (а), почках (б) и печени (в)в%кконтролю

Белок. В табл. 11 показано, что у интактных животных содержание белка распределено в слизистой тонкой кишки в пределах 99 ± 14, в тканях печени – 191 ± 15, в тканях почек – 194 ± 24 мкмоль на грамм ткани, что соответствует показателям нормы у крыс. Изменения содержания белка в тканях исследованных органов были незначительны и отличались общей динамикой во всех опытных группах: незначительное возрастание показателя к 3-м суткам и возвращение его значений к исходному уровню на 7-е сутки (рис. 12).

Рис. 12. Содержание белка в слизистой тонкой кишки (а), почках (б)ипечени (в)в%кконтролю

Анализ полученных результатов позволил выявить достоверное увеличение активности сахаразы и мальтазы в слизистой тонкой кишки, аминопептидазы М и глицил-L-лейциндипептидазы в печени и почках при внутрибрюшинном введении 25 % раствора С₆₀/ПВП. Остальные выявленные изменения активности ферментов являются незначительными и находятся в диапазоне нормальных значений активности мембранных ферментов.

В первой серии опытов животные были разделены на 6 групп по 5 крыс. Крысам 1, 2 и 3-й групп внутрибрюшинно однократно вводили соответственно по 1 мл 10 % водного раствора ПВП, 10 % водного раствора кластера С₆₀/ПВП и 25 % водного раствора кластера С₆₀/ПВП, что соответствовало 0,05 и 0,125 % содержанию фуллерена С₆₀. Животных 1 – 3-й групп выводили из опыта на 4-е сутки после введения препаратов. Крысам 4, 5 и 6-й групп вводили те же препараты в аналогичной дозе и выводили из опыта на 9-е сутки.

Во второй серии животные были разделены на 8 групп по 5 крыс. Крысам 1 – 4-й групп внутрибрюшинно однократно соответственно вводили 0,5и1мл10%раствора Tween 80, а также 0,5и1мл10 % раствора кластера С₆₀/Tween 80, что соответствовало 0,05 %-ному содержанию фуллерена С₆₀ в сравнении с 10 % раствором Tween 80. Животных 1 – 4-й групп выводили из опыта на 4-е сутки после введения препаратов. Крысам 5 – 8-й групп вводили те же препараты в аналогичной дозе и выводили из опыта на 9-е сутки.

В третьей серии животные были разделены на 6 групп по 5 в каждой. 15 крысам вводили однократно внутрибрюшинно по 1 мл 5 % водного раствора Краун-эфира и 15 – кластер фуллерена С₆₀ в 5 % водном растворе Краун-эфира, что соответствовало 0,02 %-ному содержанию фуллеренов С₆₀. Крыс 1-й и 2-й групп выводили из опыта на 4-е сутки, 3-й и 4-й – на 9-е сутки, 5 – 6-й – на 11-е сутки.

Для оценки гистоморфологических изменений при парентеральном введении С₆₀/ПВП у всех животных на момент выведения из опыта производили забор тканей головного мозга (кроме 2-й серии опытов), миокарда, легких, печени, селезенки, тонкой кишки и почек. Морфологический материал фиксировали в 10 %-ном нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах, заключали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином, азур II-эозином и изучали методом световой и поляризационной микроскопии. Результаты исследований 1-й серии представлены в табл. 12.

Таблица 12

Морфологические изменения в тканях внутренних органов при внутрибрюшинном введении ПВП и комплекса С₆₀/ПВП

Таким образом, морфологическое изучение внутренних органов показало, что внутрибрюшинное введение 10 % раствора ПВП, 10 % раствора С₆₀/ПВП и 25 % раствора С₆₀/ПВП вызывало схожие изменения в тканях внутренних органов, которые характеризовались появлением дистрофических явлений, ишемии, нарушением микроциркуляции в виде полнокровия капилляров, отека, диапедезных кровоизлияний, а также реакцией со стороны тканевых макрофагов, выражавшейся в набухании звездчатых ретикулоэндотелиоцитов, образовании гигантских многоядерных клеток типа инородных тел с формированием гигантоклеточных гранулем в селезенке (рис. 13, а, б). Наиболее выраженные изменения выявлены в селезенке, печени, миокарде, в головном мозге. Указанные изменения вызваны действием ПВП, что подтверждается данными литературы (Галахин К. А., 2006; Kuo T. T., 1984). Накопление ПВП тканевыми макрофагами и нарушение микроциркуляции вызывает усиленное образование активных форм кислорода и активацию процессов ПОЛ, которые лежат в основе патогенеза дистрофических и некротических изменений в тканях.

Рис. 13. Морфологические изменения в селезенке после парентерального введения 10 % раствора ПВП и кластера С₆₀/ПВП на 4-е сутки. Окраска: гематоксилин и эозин, ув. × 250:

а – скопление гигантских многоядерных клеток в селезенке после введения 10 % раствора С₆₀/ПВП (указано стрелкой); б – скопление гигантских многоядерных клеток в селезенке после введения 10 % раствора ПВП (указано стрелкой)

Степень выраженности указанных изменений носит дозозависимый характер и обусловлена количеством ПВП, что подтверждается результатами исследования активности мембранных ферментов, значимые изменения которой отмечены при введении 25 % раствора С₆₀/ПВП (Тюнин М. А., 2009). Сравнительная оценка интенсивности морфологических изменений между экспериментальными группами показала, что фуллерен С₆₀ в составе кластера С₆₀/ПВП снижает негативные проявления ПВП. Снижение токсичности ПВП, вероятно, связано с антиоксидантной активностью фуллерена С₆₀.

Морфологические изменения во внутренних органах крыс при внутрибрюшинном введении 0,05 % С₆₀ в 10 % растворе Tween 80 и 10 % раствора Tween 80 характеризовались умеренно выраженными дистрофическими изменениями и расстройствами микроциркуляции (табл. 13). Наибольшие изменения выявлены при введении 1 мл 0,05 % С₆₀ в 10 % растворе Tween 80 в печени на 9-е сутки: гепатоциты находились в состоянии гидропической дистрофии с вакуолизацией цитоплазмы вплоть до развития баллонной дистрофии отдельных клеток с развитием моноцеллюлярных некрозов (рис. 14, а, б). В единичных наблюдениях выявлено резкое полнокровие синусоидных капилляров. Обращает на себя внимание наличие как лимфатической инфильтрации перипортальной ткани, так и внутридольковой инфильтрации. В те же сроки введение 10 % раствора Tween 80 в дозе 1 мл вызывало в гепатоцитах меньшие изменения.

Таблица 13

Микроскопические изменения внутренних органов при внутрибрюшинном введении С₆₀/Tween 80

В других органах микроскопические изменения, как при введении 0,05 % С₆₀ в 10 % растворе Tween 80, так и 10 % раствора Tween 80, носили однотипный характер и мало зависели от дозы и сроков введения, вызывая умеренные нарушения микроциркуляции (рис. 15, а, б). Морфологические изменения внутренних органов при внутрибрюшинном введении кластера фуллерена С₆₀ в 5 % водном растворе Краун-эфира представлены в табл. 14.

Таким образом, изменения во внутренних органах крыс при внутрибрюшинном введении 0,02 % С₆₀ в 5 % водном растворе Краун-эфира и Краун-эфирав5%водном растворе носят схожий характер.

Наибольшие изменения выявлены как при введении 0,02 % С₆₀ в 5 % водном растворе Краун-эфира, таки5%водного раствора Краун-эфира в легких, печени и миокарде.

Рис. 14. Морфологические изменения в печени на 9-е сутки после введения 1 мл 0,05 % С₆₀ в 10 % растворе Tween 80. Окраска: гематоксилин и эозин, ув. × 400:

а – синусоидные капилляры расширены, полнокровны; б – вакуолизация цитоплазмы гепатоцитов, набухший звездчатый ретикулоэндотелиоцит (указано стрелкой)

При этом дистрофические изменения в печени при введении 0,02 % С₆₀ в 5 % водном растворе Краун-эфира были более выраженными на 9-е сутки и имели вид диффузной средне– и мелкокапельной жировой дистрофии. При введении Краун-эфирав5%водном растворе такие изменения выявлены лишь в единичных наблюдениях (рис. 16, а). Однако следует отметить, что на 11-е сутки в обеих опытных группах негативные дистрофические изменения клеток существенно уменьшились, полнокровие синусоидных капилляров отсутствовало и, наоборот, сменилось их выраженным малокровием (рис. 16, б).

Рис. 15. Морфологические изменения в миокарде при парентеральном введении 10 % раствора Tween 80 и кластера С₆₀/Tween 80 на 9-е сутки. Окраска: гематоксилин и эозин:

а – полнокровие капилляров (указано стрелками), отек стромы миокарда после введения 1 мл 10 % раствора Tween 80, ув. × 200; б – отек стромы миокарда после введения 1 мл 0,05 % С₆₀ в 10 % растворе Tween 80, ув. × 400

Таблица 14

Микроскопические изменения внутренних органов при внутрибрюшинном введении кластера фуллерена С₆₀ в 5 % водном растворе Краун-эфира

Во всех опытных группах патологические изменения в легких были наиболее существенными. В единичных наблюдениях развивались обширные очаги гнойной инфекции: острые абсцессы, бронхопневмонии. Можно предположить, что Краун-эфир являлся неблагоприятным фактором, способствующим повышению проницаемости аэрогематического барьера (рис. 17, а, б).

Рис. 16. Морфологические изменения в печени при парентеральном введении водного раствора Краун-эфира и кластера фуллерена С₆₀/Краун-эфира. Окраска: гематоксилин и эозин, ув. × 100:

а – в цитоплазме гепатоцитов при введении 5 % водного раствора Краун-эфира на 4-е сутки определяется эозинофильная зернистость и круглые оптически пустые вакуоли (указано стрелкой); б – при введении 0,02 % С₆₀ в 5 % водном растворе Краун-эфира на 11-е сутки определяется пенистость цитоплазмы гепатоцитов; в просветах расширенных синусоидных капилляров и центральной вены небольшое количество эритроцитов

Рис. 17. Морфологические изменения в легких при парентеральном введении водного раствора Краун-эфира и кластера фуллерена С₆₀/Краун-эфира на 11-е сутки. Окраска: гематоксилин и эозин, ув. × 100:

а – 5 % водный раствор Краун-эфира – в стенке бронха обильная инфильтрация лейкоцитами с эозинофильно окрашивающейся цитоплазмой, лимфоцитами, плазмоцитами, часть эпителия десквамирована (указано стрелкой), в просвете бронха экссудат; б – 0,02%С₆₀ в 5 % водном растворе Краун-эфира – полнокровие расширенных капилляров межальвеолярных перегородок, очаговые ателектазы (указаны стрелкой)

Во всех исследованных органах, кроме тонкой кишки, наблюдали расстройства кровообращения микроциркуляторного русла. В селезенке отмечены единичные гигантские многоядерные клетки, число которых не зависело от сроков введения (рис. 18, а, б).

В миокарде во всех опытных группах выявлены ишемические изменения кардиомиоцитов в виде сегментарных и субсегментарных контрактур кардиомиоцитов, миоцитолиза. Данные изменения были менее ярко выражены при введении 0,02 % С₆₀ на 5 % водном растворе Краун-эфира.

С увеличением времени наблюдений (на 11-е сутки по сравнению с 4-ми) дистрофические, ишемические и некробиотические изменения возрастают (рис. 19, а, б).

Таким образом, из трех кластеров фуллеренов наименьшие патологические изменения во внутренних органах крыс отмечены при внутрибрюшинном введении 1 мл 0,05 % С₆₀ в 10 % растворе Tween 80. Фуллерен С₆₀ в составе различных кластеров снижает негативные изменения во внутренних органах в связи с его антиоксидантной активностью.

Рис. 18. Морфологические изменения в селезенке при парентеральном введении водного раствора Краун-эфира и кластера фуллерена С₆₀/Краун-эфира на 11-е сутки. Окраска: гематоксилин и эозин, ув. × 400:

а – 5 % водный раствор Краун-эфира – гигантская многоядерная клетка типа инородных тел с вакуолью в цитоплазме (указано стрелкой) в красной пульпе селезенки; б – 0,02%С₆₀ в 5 % водном растворе Краун-эфира – гигантская многоядерная клетка типа инородных тел в красной пульпе селезенки (указано стрелкой)

Рис. 19. Морфологические изменения в миокарде при парентеральном введении водного раствора Краун-эфира и кластера фуллерена С₆₀/Краун-эфира на 11-е сутки. Окраска: гематоксилин и эозин:

а – 5 % водный раствор Краун-эфира – истончение, расплавление части кардиомиоцитов (указано стрелкой), полнокровие капилляров, отек интерстиция миокарда, ув. × 200; б – 0,02%С₆₀ в 5 % водном растворе Краун-эфира – сегментарные контрактуры единичных кардиомиоцитов – саркоплазма их более интенсивно оксифильно окрашена, ядро пикнотично и гиперхромно, поперечная исчерченность не определяется (указано стрелкой), отек, фрагментация мышечных волокон, ув. × 400