Текст книги "Острые респиратоные заболевания крупно-рогатого скота"

1.17. Патологоанатомические изменения при инфекционном ринотрахеите крупного рогатого скота

При вскрытии животных, убитых или павших при острой респираторной форме, обычно обнаруживают признаки серозного конъюнктивита, катарально-гнойного ринита, ларингита и трахеита, а также поражения слизистых оболочек придаточных полостей. Слизистая оболочка носовых раковин отёчна и гиперемирована, на её поверхности часто обнаруживают слизисто-гнойные, а после вторичных инфекций иногда зеленоватые наложения секрета. Местами выявляют разной формы и величины эрозийные поражения. Гнойный экссудат скапливается в носовой и придаточных полостях. На слизистых оболочках гортани и трахеи – точечные кровоизлияния и эрозии. В тяжёлых случаях слизистая трахеи подвергается очаговому некрозу. В летальных случаях возможна бронхопневмония. В лёгких встречаются очаговые участки ателектаза. Просветы альвеол и бронхов в поражённых участках заполнены серозно-гнойным экссудатом. Интерстициальная ткань сильно отёчна. Результаты вирусологических исследований показывают, что в патологически изменённых участках респираторного тракта содержится вирус.

При генитальной форме на сильно воспалённой слизистой оболочке влагалища и вульвы видны пустулы, эрозии и язвочки на разных стадиях развития. У коров к вульвовагиниту, как правило, присоединяются цервицит и эндометрит, зачастую проктит. При пузырьковой сыпи наблюдается дерматит и алопеция. У быков отечность препуция может достигать больших размеров, а на поздней стадии возможно появление фимозов и парафимозов. В заражённых клетках при гистологическом исследовании видны внутриядерные включения. Клетки с тельцами включениями обнаруживаются в пограничной зоне очага инфекции, т. е. в местах, где находится большинство заражённых вируспродуцирующих клеток.

При поражении мозга наиболее ярко выражены гиперемия и петехии. Гистологически в большинстве случаев обнаруживается лимфоцитарный энцефалит. Одновременно наблюдается периваскулярная и периневральная инфильтрация в области полушарий головного мозга и в мозжечке. В белом веществе ярко выражены инфильтраты сосудов, а в сером пролиферация глиальных клеток. У животных, которые особенно быстро погибают от болезни, наблюдается больше очагов кровоизлияний и более сильно выражена отечность, чем у тех, у которых болезнь приобретает затяжной характер и вызывает процессы дегенерации.

При абортах интервал между гибелью плода и взятием органов из патологического материала имеет решающее значение для постановки надёжного диагноза. Патологическая картина, наблюдаемая у плодов, погибших в результате заболевания, отмечается отёчность и незначительные аутолитические явления. На плевре и лёгких могут быть поверхностные кровоизлияния, которые наблюдаются в большей или меньшей степени в эпикарде и перикарде. Петехии встречаются обычно в лимфатических узлах, в слизистой оболочке желчного пузыря и половых путях. Волосы и кожа желтовато-коричневого цвета, подкожные ткани – коричневато-красные. Между мышечными волокнами отмечается скопление тёмно-красной жидкости, полости – тела заполнены водянистой тёмно-красной жидкостью. Почки окружены геморрагическим отеком. Микроскопически патологические изменения характеризуются мелкими очаговыми некрозами и кровоизлияниями, которые обнаруживаются в печени, селезёнке, почках, лёгких и головном мозге. Аналогичные изменения могут наблюдаться в вилочковой, поджелудочной железе, желчном пузыре, матке и влагалище.

При поражении глаз конъюнктива века сильно гиперемирована, с явлениями отёка, который распространяется и на конъюнктиву глазного яблока. Конъюнктива покрыта саловидным налётом. Часто в ней образуются сосочкообразные бугорки размером около 2 мм. Местами на ней выявляют небольшие эрозии и язвочки.

При поражении вымени обнаруживают серозно-гнойный диффузный мастит. Поверхность разреза отёчна, отчетливо гранулирована вследствие увеличения пораженных долек. При надавливании с неё стекает мутный гноеподобный секрет. Слизистая оболочка цистерны гиперемирована, набухшая и пронизана кровоизлияниями. Местами встречаются эрозийные поражения слизистой с фибринозными наложениями.

Гистологически все слизистые оболочки инфильтрированы лейкоцитами, лимфоцитами, плазматическими клетками. В гиперпластически и дистрофически изменённом эпителии обнаруживают ацидофильные внутриядерные включения.

1.18. Иммунитет при инфекционном ринотрахеите крупного рогатого скота

При инфицировании организма ИРТ КРС защитную роль играют специфические, неспецифические гуморальные и клеточные факторы иммунитета, связанные с участием антител, макрофагов, лимфоцитов, лейкоцитов и интерферона. При этом следует учитывать, что ИРТ КРС протекает при пожизненной персистенции вируса, при периодических вспышках обострения заболевания и ремиссиях и является вторичным иммунодефицитным состоянием.

Вируснейтрализующие антитела, активность которых усиливается в присутствии комплемента, играют более важную роль в противовирусном иммунитете и сохраняются более длительное время, чем комплементсвязующие. Механизм действия антител на инфицированные клетки связан с угнетением выхода вируса в окружающую среду. При ИРТ КРС наблюдается образование комплексов вирус-антитело. Патогенетическая роль иммунных комплексов связана с их возможным участием в развитии иммунопатологических повреждающих изменений в организме и с влиянием на функции различных эффекторных клеток. Не исключено, что при рецидивирующем ИРТ неэффективность сывороточных противовирусных антител связана с образованием аналогичных инфекционных комплексов вирус-антитело. Антитела могут лизировать инфицированные клетки в комбинации с комплементом, Т-лимфоцитами, макрофагами.

Таким образом, при ИРТ КРС наблюдается синтез широкого спектра антител, представленных IgM, IgG, IgA, IgE. Ведущую роль в иммунитете играют антитела против оболочечных антигенов вируса и мембранных вирусспецифических антигенов инфицированных клеток.

Для профилактики и лечения ИРТ КРС важную роль играет иммунокоррекция. Иммунокоррекция предлагает использование фармакологических средств для повышения функциональной активности иммунной системы. Она может увеличивать и снижать уровень иммунного ответа. Специфическая иммунокоррекция ограничивается действием одного антигена, а неспецифическая – вызывает более общие изменения в иммунном ответе.

Иммуномодуляторы подразделяются на четыре группы – биологические вещества, препараты, полученные из микробов, синтетические, растительные. В настоящее время хорошо изучена биологическая активность основных гормонов тимуса, которые стимулируют Т-клеточную активность иммунитета при ИРТ КРС. К этой группе препаратов относятся тимозин, тимопоэтин, тимулин.

Опиоидные пептиды, синтезируемые гипофизом (эндорфины) и надпочечниками (энцефалины), также оказывают стимулирующее действие на функцию лимфоцитов. Они поддерживают уровень иммунного ответа, способствуя Т и В-клеточной коррекции. Эндофины и энцефалины совместно с андренокортикотропными гормонами уменьшают стрессовую реакцию организма.

Хорошо известно не только противовирусное, но и иммуномодулирующее действие интерферона. Интерферон модулирует активность клеток иммунной системы путем активации макрофагов, стимуляции Т-клеток. Смесь генно-инженерных интерферонов альфа, получаемых микробиологическим синтезом представляет миксоферон. Препарат имеет высокие иммуномодулирующие и антивирусные свойства, обеспечивает прайминг интерфероногенеза, активацию макрофагов и природных киллеров, придание клеткам антивирусного статуса и репликации вирусов.

К синтетическим полинуклеидам, обладающим противовирусными и иммуномодулирующими свойствами относятся препараты типа иммунофан, риботан, лигаверин, поликсидоний, которые применяют согласно прилагаемых инструкций.

В практике оздоровительных мероприятий при ИРТ КРС широкое применение получаю адаптогены. Адаптогены – это группа веществ, в основном растительного происхождения, которые повышают устойчивость организма животных, стимулируют синтез ряда эндогенных биостимуляторов, активизирующих иммунную систему, обладающих противовирусным действием (эроконд, виватон, видор).

Интерес к иммуностимулирующей терапии резко возрос в последние годы и связан, прежде всего, с решением задач инфекционной патологии. Исследование в этой области позволяет по-новому подойти к селекционной модуляции тех или иных звеньев, и служат теоретической основой для разработки препаратов избирательного действия.

На основании экспериментальных данных и результатов, полученных при использовании препаратов миксоферон, эроконд, виватон, видор в хозяйствах Свердловской области с профилактическими и лечебными целями были разработаны схемы их применения.

Так, активная иммунизация коров-матерей против ИРТ КРС фоне введения вышеперечисленных иммуномодуляторов способствует накоплению специфических антител в молозиве и последующую передачу их потомству, что профилактирует вспышки ИРТ КРС среди новорожденных телят. Иммунокоррекция этими препаратами организма стельных коров снижает в 1,9 раза число осложнений при беременности, родах (мёртворождение, аборты, эндометриты), что служит основанием для возможного повышения эффективности осеменения крупного рогатого скота с их помощью.

Обработка молодняка иммуномодуляторами при отъёме и переводе в группы, предотвращает негативные последствия стрессов.

Иммуномодуляторы миксоферон, эроконд, виватон, видор безвредны для животных, оказывают выраженное влияние на стимуляцию специфического иммунитета, повышают протективную активность вакцин.

1.19. Вакцины при инфекционном ринотрахеите крупного рогатого скота

В связи с тем, что на закрытые предприятия по производству молока, или племенные, вирус заносится либо со спермой, либо с латентным вирусоносителем, то ущерб, причиняемый развивающимся вследствие этого ИРТ КРС у коров и телят, может быть значительным. Причём типичные клинические симптомы ИРТ могут отсутствовать, но у осеменённых коров развиваются массовые метриты и другие патологические состояния, у телят клинические признаки острого респираторного заболевания.

Для специфической профилактики ИРТ КРС в таких хозяйствах разработаны как живые, так и инактивированные вакцины. Для предприятий молочного и племенного скотоводства большое значение имеет продолжительность иммунитета после вакцинации. При этом, вакцинопрофилактика до последнего времени остаётся единственным фундаментально проработанным методическим приёмом для эффективного противостояния инфекционным заболеваниям.

Единого мнения о применении живых или убитых вакцин нет. В каждой стране вопрос об использовании той или иной вакцины решается в зависимости от эпизоотической ситуации.

Вакцины, применяемые в ветеринарной практике, представлены в таблице 21.

Таблица 21 – Вакцины применяемые ветеринарной практике за рубежом и в России.

В Свердловской области для профилактики ИРТ КРС применяются вакцины – сухая культуральная ассоциированная “Тривак”, сухая культуральная ассоциированная “Бивак”, инактивированная вакцина против ИРТ КРС, инактивированная комбинированная вакцина “Комбовак”. Вакцины формируют у привитых животных напряжённый иммунитет, который складывается из развития местного (секреторного) и гуморального, и рекомендованы для применения в хозяйствах репродуктивного типа. Изменившийся вектор генетической эволюции многих вирусов в сторону увеличения контагиозности и патогенности, лишил практических специалистов возможности проводить полноценную иммунопрофилактику болезней только с помощью живых вакцин. В самый уязвимый период жизни (до 30–40 дней) телёнку приходится выдерживать до 10 циклов вакцинаций. При этом живые вакцины, благодаря конструктивным особенностям, плохо объединяются в один препарат. Они надёжно эффективны только при не менее чем двукратном, последовательном применении с временным разрывом в 10–14 дней. Эффективность иммунизации живыми вакцинами, как правило, предполагает соблюдение ряда обязательных требований, предусматривающих обеспечение максимальной однородности титров материнских антител и необходимость определения оптимальных сроков иммунизации по их уровню, исключение интерференции с другими полевыми и вакцинными вирусами, преодоление трудностей, связанных с соблюдением точной дозировки, что нередко нивелирует явные преимущества в материальных и рудовых затратах на проведение иммунопрофилактики традиционными приёмами. Но самым главным является то, что живые вакцины обуславливают отчётливо регистрируемые или скрытые иммуносупрессии, направленному изучению которых посвящено очень незначительное количество работ и роль которых в полиэтиотропных эпизоотических ситуациях, характерных для современных промышленных хозяйств практически не известна.

В настоящее время перспективно использование убитых формалином вирусных вакцин для терапевтического применения, в том числе при персистентной хронической герпетической инфекции, обусловленной вирусом ИРТ КРС. Герпетическая инфекция крупного рогатого скота является наиболее распространенным в мире иммунодефицитным заболеванием с пожизненной персистенцией вируса в нервных ганглиях и периодическим обострением клинических проявлений с их локализацией на постоянных для каждого больного “locus minoris resistencial” (глаза, слизистая гениталий, кожа и т. д.). Инфекция, обусловленная вирусом ИРТ КРС отличается выраженным полиморфизмом. Вирус поражает центральную и периферическую нервную систему, кожные и слизистые покровы, глаза, органы мочеполовой системы, при генерализации процесса – печень, почки, оказывает канцерогенное воздействие.

Вирус ИРТ КРС приводит к развитию либо локализованного, при этом поражается один и тот же “locus minoris resistencial”, либо при ослабленном иммунитете генерализованного заболевания, например генерализованный герпес новорожденных телят.

Результаты наших многолетних наблюдений, а также тщательное изучение данных литературы позволяют сделать вывод, что многочисленные средства, применяемые для лечения острых проявлений заболевания, включая длительное применение иммуномодуляторов, не способны предотвратить возникновения рецидива после провоцирующих факторов (охлаждение, сопутствующие острые заболевания другой этиологии и т. д.).

Мы сочли актуальным сосредоточить усилия на разработке и обосновании целесообразности применения инактивированных вакцин для гарантированного предупреждения заболеваемости ОРВИ КРС у телят всех возрастов, начиная с первого дня жизни, поскольку с середины прошлого десятилетия ОРВИ КРС приобрел угрожающий характер. При этом, основное внимание уделяли разработке безопасной вакцины, применение которой обеспечивало бы не только снижение традиционного показателя заболеваемости крупного рогатого скота, но и способствовало сохранению на высоком уровне их продуктивность, как конечного результата хозяйственной деятельности в промышленном скотоводстве.

Результаты наших исследований на моделях хронической инфекции ИРТ КРС (телята, коровы) с использованием формолквасцовой вакцин, а также последующий 2-х летний опыт, контролируемых клинико-лабораторных испытаний этой вакцины показали, что данный препарат является активным средством профилактики рецидивов болезни.

Формолквасцовая вакцина против ИРТ КРС для терапии и профилактики рецидивов этих заболеваний, разработанная в ФГОУ ВПО “Уральская государственная сельскохозяйственная академия” на кафедре инфекционных и инвазионных болезней проходит развернутые экспериментальные и клинические испытания с 2009 года. Результаты изучения противорецидивной терапии на 1500 больных телят за 1,5 года показали достоверный лечебный и десенсибилизирующий эффект вакцинации при генитальной и кожной формах ИРТ КРС.

Современные иммунологические подходы к пониманию эффективности использования вакцин открывают широкие перспективы для совершенствования уже существующих и создания новых лечебных вакцин.

Большое значение в повышении иммуногенности вакцин против ИРТ КРС имеет опыт сочетанного использования их с иммуномодуляторами. Применение вакцин против ИРТ КРС с видором, являющимся активатором реакций Т– и В-клеточного иммунитета, позволило нам повысить иммуногенность вакцин “Комбовак”, “Тривак”, “Бивак”, инактивированной формолквасцовой вакцины против ИРТ КРС и тем самым снизить кратность вакцинации. Одно из объяснений лечебного эффекта убитых вакцин при их применении связано с уменьшением иммунопатологических реакций, особенно протекающих с повреждением персистирующим вирусом иммунных Т– и В-клеток. В результате вакцинотерапии организм в большей степени переключается на эффективный протективный иммунный ответ.

Согласно гипотезе, терапевтические убитые вакцины при латентных вирусных инфекциях способствуют восстановлению способности лимфоцитов узнавать протективные эпитопы вируса, что может быть нарушено при хроническом течении инфекции. Применение терапевтических убитых вакцин ведёт к существующему улучшению клинического статуса заболевания.

1.20. Влияние вакцинаций на инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота у латентно инфицированных быков-производителей

В настоящее время чёрно-пёстрый скот в Российской Федерации является ведущей породой по численности и молочной продуктивности. Как свидетельствуют данные бонитировки 1991 года, значительное поголовье данной породы было сосредоточено в Центральном регионе (20,1 %), Западно-Сибирском (17,0 %), Уральском (15,6 %) и Поволжском (12,3 %).

При определении курса на интенсивное разведение скота чёрно-пёстрой породы учитывали не только его высокую молочную продуктивность, но и лучшую приспособленность к промышленной технологии. Исследования показали, что животные этой породы имеют вымя с улучшенными морфофункциональными качествами.

На Урале чёрно-пёстрый скот был выведен в результате скрещивания тагильских коров с быками остфризской породы с последующим разведением помесой II и III поколений “в себе”.

В ведущих племенных хозяйствах зоны Урала при благоприятных условиях кормления надои составили 5500–7500 кг молока, что свидетельствует о высоком генетическом потенциале уральского чёрно-пёстрого скота.

В период с 1965 по 1985 гг. с целью улучшения племенных и продуктивных качеств чёрно-пёстрого скота, широко использовались производители голландской чёрно-пёстрой породы. Однако, животные уральского зонального типа имели недостатки. К ним, в первую очередь, следует отнести недостаточно выровненную форму вымени и невысокий коэффициент молочности. В связи с этим, в начале 80-х годов в ряде племенных хозяйств с целью улучшения породных и продуктивных качеств чёрно-пёстрого скота начали использовать быков голштинской и британо-фризской пород, существенно сократив число используемых производителей голландской селекции. В конце 80-х начале 90-х гг. производилось массовое скрещивание чёрно-пёстрого скота с быками голштинской породы.

Поскольку голштинский скот подвержен заболеванию инфекционным ринотрахеитом, в 80-90-х гг. начались вспышки заболевания ИРТ КРС в хозяйствах Свердловской области. Возник вопрос о необходимости изучения этиологической структуры ОРВИ КРС в племенных и товарных хозяйствах.

Так, в ОАО “Уралплемцентр”, где в настоящее время содержаться быки-продуценты спермы, до 2000 г. вакцинация животных не проводилась.

Для процента инфицированности быков однократно отбирали пробы сыворотки крови и исследовали в реакции нейтрализации.

Результаты исследований представлены в таблице 22.

Таблица 22 – Распространение ИРТ КРС на головном племпредприятии по результатам серологических исследований.

Анализ полученных результатов показал, что ИРТ распространен среди быков-производителей ОАО “Уралплемцентр”. Вируснейтрализующие антитела к вирусу ИРТ КРС выявлены в пробах сыворотки от 27 животных, что составляет 52 % от числа исследованных.

Известно, что вирус ИРТ КРС способен формировать латентную (скрытую) форму инфекции после первичного острого переболевания. Клинических признаков при этом не наблюдается. Под влиянием различных экзо– и эндогенных факторов, снижающих или подавляющих иммунный контроль со стороны организма, вирус способен реактивироваться и выделяться во внешнюю среду через первично инфицированный орган не теряя своей патогенности для восприимчивых животных. Такое носительство может длиться пожизненно, оно опасно в эпизоотическом плане, так как животное-вирусоноситель является скрытым источником возбудителя инфекции и способствует сохранению его в популяции.

Особенно опасны в этом отношении быки-производители, у которых болезнь чаще протекает латентно. Учитывая масштабы использования спермы для искусственного осеменения риск распространения инфекции многократно возрастает.

В условиях глубокой заморозки в банке семени храниться полученная за период эксплуатации от инфицированных рабочих, так и выбракованных быков сперма. Такие банки могут насчитывать до нескольких миллионов эякулятов.

В связи с этим целью исследования было изучить инфицированность вирусом ИРТ КРС банка семени, полученных как от живых, так и выбракованных ранее быков-производителей методом молекулярной гибридизации.

Выделение латентного вируса зависит от многих факторов: резистентности организма, наличия стрессов и т. д. и эякуляты, полученные за один месяц, не всегда могут быть контаминированы вирусом в 100 % случаев, поэтому для исследования отбирали по одной грануле из каждого эякулята и объединяли их в одну пробу.

В 2000–2003 гг. исследовали 1342 проб семени, полученных от быков-производителей ОАО “Уралплемцентра”. Результаты исследований представлены в таблице 23.

Таблица 23 – Распространение ИРТ КРС на головном племпредприятии по данным молекулярной гибридизации в 2000–2003 гг.

Анализ результатов молекулярной гибридизации инфицированность банка спермы, полученной от быков-производителей и хранящейся в условиях глубокой заморозки, составляет 27,4 %.

Достаточно высокий процент инфицированности животных на племпредприятии связан с неконтролируемым завозом инфицированных быков-производителей, отсутствием элевера, диагностических, профилактических и оздоровительных мероприятий.

Таким образом, ИРТ КРС широко распространён среди живых быков-продуцентов спермы, а также имеет место контаминация банка спермы, полученной от быков-производителей в различные годы, хранящейся в условиях глубокой заморозки.

На протяжении 12–14 лет ОАО “Уралплемцентр” оставался неблагополучным по данному заболеванию и постоянно поставлял в хозяйства области и за её пределы инфицированную сперму.

Установлено, что, 2000–2003 гг. ИРТ КРС среди быков-производителей составлял от 0,6 до 1,49 % от общей патологии на племпредприятии. Экстенсивные показатели эпизоотологического процесса ИРТ КРС среди быков имели выраженное непостоянство.

Так, в 2003 году, в сравнении с 2002 годом, количество выявленных вирусоносителей по ОАО “Уралплемцентр” существенно снизилось, что, вероятно, связано с иммунизацией их инактивированной вакциной против ИРТ КРС, которая, по-видимому, частично сдерживает выход вируса из латентного состояния и сокращает количество рецедивов заболевания на определённый срок. В 2004–2006 гг. после внедрения поголовной иммунизации быков-производителей против ИРТ КРС выделить вирус не удавалось.

Для того, чтобы определить связь между введением в хозяйство контаминированной вирусом спермы и возникновением ИРТ КРС у коров и телят в 2000–2003 гг. мы изучили роль латентно инфицированных быков-производителей, принадлежащих ОАО “Уралплемцентру” в распространении ИРТ КРС. Результаты исследований приведены в таблице 24 (выборочно).

Таблица 24 – Связь между введением в хозяйство контаминированной вирусом спермы и возникновением ИРТ КРС у коров и телят

По нашим данным число гинекологически больных коров в некоторых хозяйствах не превышало 60 %, в других составило 85–90 %. В дальнейшем заболевание у коров переходило в латентную форму, и они становились источником возбудителя. В таких хозяйствах отмечали массовые респираторные болезни телят. При этом отход молодняка составил от 30 до 90 %.

После осеменения инфицированной спермой коров у них отмечали серозно-слизистые выделения из половых органов, на слизистой оболочке влагалища и вульвы отёки и гиперемию, мелкие пустулы, которые увеличивались и лопались. Течение основного заболевания сопровождалось развитием секундарной инфекции. У животных снижались удои и масса тела.

Учитывая приведённые выше данные, становится очевидным, что с использованием инфицированной спермы риск распространения ИРТ КРС значительно возрастает. В идеале станция искусственного осеменения должна быть абсолютно свободной от ИРТ КРС. Однако, достичь этого в современных условиях почти невозможно, поэтому, необходимо стремиться к тому, чтобы гарантировать получение и использование свободной от вирусов спермы при неблагополучии станции. Одним из доступных путей является разделение поголовья быков на “безвирусное” и “абсолютно безвирусное” стадо, и такой статус должен поддерживать с помощью детального осуществления программы вакцинации под постоянным контролем.

В результате нами были проведены исследования с целью изучения влияния иммунизации латентно инфицированных быков-производителей инактивированной вакциной по разработанной нами схеме, на частоту выделения вируса со спермой.

С целью снижения частоты реактивации и реэкстрекции полевого вируса ИРТ КРС со спермой инфицированных быков нами была разработана и испытана схема вакцинации быков-производителей.

Группы опытных быков формировали с учётом частоты реактивации вируса ИРТ КРС из латентного состояния и выявления его ДНК в пробах спермы до и после иммунизации коммерческой инактивированной вакциной против ИРТ КРС.

В опыте использовали 27 быков-производителей, принадлежащих ФГУП “Свердловское”, латентно инфицированных вирусом ИРТ КРС. У всех животных в пробах сыворотки крови до вакцинации выявляли вируснейтрализующие антитела к вирусу ИРТ КРС в титрах 1:2–1:16.

Животных поделили на 4 группы:

Первая группа быков-производителей, в количестве 7 голов служили контролем и прививались по стандартной схеме 1 раз в 6 месяцев вакциной двукратно через 14 дней, в дозе 2,0 мл в среднюю треть шеи.

Во вторую группу быков-производителей в количестве 7 голов отобрали животных, у которых ДНК вируса выявляли периодически в единичных сериях спермы. Животным этой группы вакцину вводили 1 раз в 4 месяца подкожно в дозе 2,0 мл в среднюю треть шеи.

Третью группу быков-производителей в количестве 6 голов, постоянно выделяющих вирус ИРТ КРС со спермой, прививали вакциной подкожно по 4,0 мл один раз в месяц.

Четвертую группу быков-производителей в количестве 7 голов, выделяющих вирус ИРТ КРС с перемежающим характером (положительно-отрицательно и наоборот) иммунизировали вакциной в дозе 0,4 мл внутрикожно один раз в месяц безыгольным инъектором.

Предварительные исследования, проведённые нами до вакцинации, выявили ДНК вируса в первой группе животных – 36,8 %, во второй – 30,2 %, в третьей – 52,7 %, в четвертой – 35 %, при общей контаминации вирусом спермы 38,4 %.

Наблюдения за опытными животными проводили в течение 12 месяцев. Отбор проб спермы не прекращали. Эякуляты, полученные за один месяц, объединяли и исследовали как одну пробу. Всего методом молекулярной гибридизации исследовали 324 пробы спермы, полученной от опытных быков-производителей.

От животных всех групп ежемесячно отбирали пробы сыворотки крови и исследовали в реакции нейтрализации в культуре клеток MDBK. Для сравнения оценивали степень инфицированности спермы быков в течении 12 месяцев, предшествующих вакцинации и в течение 12 месяцев после неё.

Анализ данных показал, что вакцинация не может предотвратить латенцию полевого вируса, но может сокращать его выделение со спермой на срок наблюдения.

Так, у животных первой группы средний процент инфицированности спермы, полученной в течение года до вакцинации, составил 36,8 %, а после введения вакцины по усовершенствованной схеме в течение 12 месяцев – 17,5 %, т. е. количество инфицированных серий спермы снизилась примерно в 2,1 раза. Средние значения титров вируснейтрализующих антител у быков этой группы понизились до 2,40+0,40 lg₂, что ниже в целом по группе на 0,20+0,14 lg₂ (разница не достоверна Р > 0,5).

У животных 2 группы до вакцинации выявили ДНК вируса ИРТ КРС в 30,2 % исследованных проб, а после введения вакцины вирус не обнаруживали вообще, т. е. выявление ДНК вируса уменьшилось в 30,2 раза. Такой низкий процент выявления вируса, видимо, связан с тем, что частота выделения вируса у этих быков до вакцинации была низкой (1–2 раза в месяц). Средние значения титров вируснейтрализующих антител у быков этой группы повысились на 2,20+0.28 lg₂.

У животных 3 группы до вакцинации выявили ДНК вируса ИРТ КРС в 52,7 % полученных проб, а после цикла введения вакцины его обнаруживали в 11,4 % исследованных проб, т. е. выявление ДНК вируса уменьшилось в 4,6 раз. Средние значения титров вируснейтрализующих антител у животных этой группы также повысились за период наблюдения незначительно (Р > 0,05).

Быки четвертой группы до вакцинации ДНК ИРТ КРС выделяли вирус в 35 % всех полученных проб спермы, а после вакцинации процент инфицированности спермы у животных этой группы составил 2,4 %, т. е. частота выделения вируса уменьшилась в 14,6 раз. Средние значения титров вируснейтрализующих антител у животных этой группы также повысились за период наблюдения незначительно (Р > 0,05).

Результаты опытов по вакцинации быков-производителей ФГУП “Свердловское”, в среднем по четырем группам, показали снижение частоты выделения вируса со спермой с 38,4 % до 7,8 %, т. е. почти в 5 раз (2003 год), и до 0,9 % (2006 год).

Полученные результаты позволили сделать предположение, что схемы предусматривающие введение коммерческой инактивированной вакцины против ИРТ КРС внутрикожно в дозе 0,4 мл один раз в месяц и подкожно 1 раз в 4 месяца являются наиболее эффективными и позволяют контролировать процесс выделения вируса со спермой у латентно инфицированных быков-производителей.

Такая высокая эффективность вакцинации, на наш взгляд, объясняется способом ведения вакцины.

Известно, что эффективность вакцинации во многом зависит от способа доставки антигена.

Показано, что эффективность трансфекции в коже выше, чем в мышцах. В последние годы трансдермальный маршрут введения различных лекарственных препаратов, в том числе и вакцин, привлекает к себе большое внимание исследователей. Этот способ использовался в фармацевтической практике для поставки различных низкомолекулярных веществ в организм человека. Некоторые из подходов используются в ветеринарной практике для доставки веществ с более низким молекулярным весом, в частности белков или полинуклеотидных вакцин (M. Engles. 1986). Так, некоторые учёные (R. Wyler. 1986) на примере генно-инженерной вакцины показали, что внутримышечное введение ДНК-плазмиды, кодирующей гликопротеин D (gD) вируса ИРТ КРС стимулирует иммунный ответ у крупного рогатого скота. Наибольшую устойчивость к контрольному заражению проявили телята, иммунизированные интрадермально.