Текст книги "Высокодисперсные коллоидные системы и меланины чаги"

Дисперсная фаза коллоидной системы водного извлечения чаги

Дисперсная фаза коллоидной системы водного извлечения чаги представлена полифенолоксикарбоновым комплексом – меланином. В различных исследованиях полифенолоксикарбоновый комплекс называли сначала гуминоподобной чаговой кислотой, потом сложным пигментным или хромогенным комплексом. Изучение его физических и химических свойств позволило впоследствии назвать его полифенолоксикабоновым комплексом, а затем меланином [56-57,74, 95,126,147,159]. В этом разделе остановимся на химических свойствах и составе соединений, входящих в его состав.

Меланин растворим в воде, но при изменении рН водного раствора с 5,5 до 2,5-2,0 выпадает в осадок в виде бурых хлопьев. Свежеосажденный меланин хорошо растворяется только в растворах щелочей и гидрокарбоната натрия, а также в 80 % ацетоне и 50 % этаноле. В остальных органических растворителях меланин или не растворяется совсем (бензол, ксилол, хлороформ, петролейный эфир), или растворяется слабо (в этилацетате до 11 %, в диэтиловом эфире до 2,5 %). Меланин, высушенный на воздухе и при повышенной температуре, почти целиком теряет свою растворимость, а высушенный в вакууме сохраняет эту способность в растворах гидрокарбоната натрия и щелочи. При перегонке комплекс разлагается, образуя темную углеподобную массу. После диализа в меланине содержится от 0,5 до 1,5 % золы [150].

Содержание азота в меланине имеет очень низкое значение. В работе [163] проведено исследование его аминокислотного состава. С этой целью проведен гидролиз диализированного и высушенного меланина 6н соляной кислотой в течение 24 часов в запаянной ампуле при температуре 105 °C. В продуктах гидролиза авторами было показано наличие 15 аминокислот: аспарагиновая кислота – 0,07 %; глутаминовая кислота – 0,13 %; глицин – 0,22 %; серин – 0,10 %; треонин – 0,10 %; аланин – 0,10 %; лейцин – 0,05 %; метионин – 0,06 %; тирозин – 0,08 %; лизин – 0,06 %; гистидин – 0,05 %; аргинин – 0,02 %; триптофан – 0,10 % от сухого веса; цистин и пролин – следы; 5 не идентифицированных аминокислот. Рассчитанная сумма всех аминокислот в процентах к условному протеину меланина составила 45,60 %, что свидетельствует о белковой природе значительной части азота, связанного с меланином.

Для анализа полисахаридного состава меланина после диализа проведен его гидролиз 2н раствором соляной кислоты на водяной бане в течение 5 часов. Авторами было установлено, что общее количество сахаров, определяемых по методу Бертрана, содержащихся в гидролизате, не превышало 10,00 % от сухих веществ гидролизата или 2 % от первоначального веса меланина. Определение качественного состава показало наличие в гидролизате глюкозы, ксилозы и следов галактозы. Авторами было высказано предположение, что полисахариды в нём присутствуют в виде более низкомолекулярных соединений, чем целлюлоза, поскольку её обнаружить не удалось [181].

Согласно литературным данным, полифенолоксикарбоновый комплекс по своим физико-химическим свойствам занимает промежуточное положение между лигнином и гуминовыми кислотами [182,183]. Образование меланина в процессе жизнедеятельности гриба является, по-видимому, его защитной реакцией на вредное воздействие высвобождаемых при разрушении лигнина его строительных единиц [40,160]. Исследование химического состава полифенолоксикарбонового комплекса, проведенное по методикам принятым, для гуминовых кислот, показало, что он содержит значительно больше карбоксильных групп (6,50 %), чем гуминовые кислоты почв (3,58 %) и лигнин древесины (0). При этом количество метоксильных групп в нем меньше (5,81 %), чем у лигнина (15,70 %), но больше, чем у гуминовых кислот торфа (1,20 %). Содержание гидроксильных групп максимально у гуминовой кислоты из торфа (4,25 %), а в других анализируемых объектах они не обнаружены [184].

В работе [159] для исследования состава ароматической составляющей меланина авторы применили целый ряд методов для расщепления комплекса на более простые соединения, растворимые в органических растворителях.

При щелочно-нитробензольном окислении комплекса выход эфирорастворимых веществ составил около 30 % от его сухого веса. Основными продуктами распада были летучие соединения (альдегиды и кетоны), кроме того, был обнаружен ванилин [159]. На этом основании было предположено [55], что полифенолоксикарбоновый комплекс образуется в результате жизнедеятельности гриба на основе разрушаемого грибом лигнина берёзы. Для исключения нитробензола как сильного окислителя был выбран гидролиз комплекса 10 % раствором соляной кислоты и 20 раствором гидроокиси калия, который проводили под давлением 1,5 атм. при температуре 180 °C в течение 1, 3, 5 часов [159]. При щелочном гидролизе комплекса выход эфирорастворимых веществ был гораздо выше. При этом установлено, что продукты гидролиза на 98 % состоят из веществ кислотного характера, а на долю фенолов, оснований и нейтральных веществ приходится лишь 2 % от его сухого веса. Показано, что способ расщепления комплекса оказывает влияние на качественный состав выделяемых фракций, так как среди продуктов кислотного гидролиза был обнаружен ряд веществ, которые отсутствовали среди аналогичных фракций, полученных при проведении щелочного гидролиза комплекса [159]. В его гидролизатах были идентифицированы ванилиновая, сиреневая, п-оксибензойная, галловая, пирогалловая и протокатеховая кислоты, ванилин, сиреневый альдегид, а также этерифицированные производные синапового и кониферилового альдегидов. Авторами впервые было показано наличие пропилфенольных соединений – строительных единиц лигнина – в составе ароматического ядра комплекса, ряд ароматических кислот, образующихся при его гидролизе, авторами идентифицировать не удалось [144,159,184]. Для полифенолоксикарбонового комплекса характерным является постоянное соотношение сиреневых и гаваяциловых единиц, равное 3:1 (таблица 9) [182].

В работе Е.А. Калашниковой [9] проведено исследование химического состава меланина после его гидролиза соляной кислотой в автоклаве под давлением 121,59 кПа в течение двух часов. С помощью ТСХ автором идентифицированы: фенолы (резорцин или пирокатехин), фенолкарбоновые кислоты (кофейная кислота), флавоноиды (апигенин и кверцетин) и углеводы (глюкоза и ксилоза).

В работе Г.Л. Рыжовой [8] проведено исследование гидролизата меланина, выделенного из водного извлечения, полученного с применением ультразвука [7]. Качественный состав фенольной фракции состоял из п-крезола, пирокатехина, α-нафтола, гидрохинона, резорцина.

Таблица 9 Состав продуктов гидролиза полифенолоксикарбонового комплекса (ПФК) и некоторых природных объектов (в % от сухого веса эфирорастворимых соединений) [148]

Определены флавоноиды, принадлежащие к классам флавонов, флаванонов, катехинов (апигенин, нарингенин, морин, кверцетин). Впервые авторами в гидролизате меланина обнаружены высшие жирные кислоты нормального строения С₁₀, С₁₂ и С₁₄, а также кислоты изостроения С₁₃, С₁₅.

Таким образом, полученные в работах [8,9,35,62,185] данные свидетельствуют о том, что полифенолоксикарбоновый комплекс содержит продукты окислительной конденсации строительных единиц лигнина, высвобождаемых грибом, и они аналогичны соединениям, образующимся при гидролизе лигнина (таблица 9).

Исследование полифенолоксикарбонового комплекса выделенного из природной чаги и выращенного в культуре с помощью ИК-спектроскопии применялось ранее А.Н. Шивриной [186] для его идентификации, а также подтверждения сходства со спектрами гуминовых кислот. Авторами показано, что ИК-спектры отражают отличие полифенолоксикарбонового комплекса и гуминовых кислот по содержанию карбоксильных, метоксильных и гидроксильных групп. В спектре природной чаги наблюдается интенсивная полоса поглощения, лежащая в области 3600-2857 см^-1. Здесь наблюдается широкая интенсивная полоса поглощения, лежащая в области от 3350-3250 см^-1, что соответствует валентным колебаниям ОН-группы. Небольшие пики в области 3220-3140 см^-1 могут вызываться колебаниями групп СН и СН₂ групп. В спектре наблюдается сильное поглощение в области от 1750-1600 см^-1. Для гуминовых кислот характерно сильное поглощение в этой области спектра. Для двойных связей С=С, С=О и С=N характерная область поглощения от 1724-1600 см^-1. Имеющиеся в молекуле гуминовых кислот двойные связи С=С ароматического кольца, по литературным данным [187], из–за своей симметричности дают не очень интенсивные полосы поглощения. У гуминовых кислот полоса 1613 см^-1 отвечает колебаниям С=С в конденсированной ароматической системе. В спектре полифенолоксикарбонового комплекса, выделенного из природной чаги, авторы [186] относят поглощение при 1615 см^-1 к колебаниям С=С связей в конденсированной ароматической системе. Область поглощения карбонильных групп наблюдается при 1728 и 1713 см^-1. Колебания в области 1250-1110 см^-1 характерны для эфирных связей С-О-С. Согласно данным [62], полифенолоксикарбоновый комплекс имеет достаточно большое количество полярных групп, таких, как метоксильные 5.81 %, карбонильный кислород 4.50 %, карбоксильные 6.50 млэкв/г (в расчете на чистое органическое вещество). Колебания связей карбоксильных групп и карбоксилат иона наблюдаются в области 1200 – 1800 см^-1. В этой области проявляются колебания других присутствующих в полифенолоксикарбоновом комплексе связей, таких, как колебания СН бензольных колец, СН и СН₂ колебания алкильных радикалов, С=С и С=О связей, а также колебания эфирных связей [188]. Взаимодействие зольных элементов с полярными группами полифенолоксикарбонового комплекса, по-видимому, может приводить к изменению в спектре, соответствующему соотношению в нём свободной карбоксильной группы и группы участвующей в соле или комплексообразовании. Такие изменения наблюдаются и в ИК спектрах гуминовых кислот [189]. ИК спектры полифенолоксикарбоновых комплексов, выделенных из чаги, выращенной в культуре на различных субстратах в течение до четырнадцати месяцев, не соответствовали ИК спектрам полифенолоксикарбоновых комплексов, выделенных из природной чаги [186,190].

Изучению парамагнитных характеристик природных объектов уделяется большое внимание. Особенно эти характеристики важны для лекарственных препаратов и БАД, предназначенных для лечения заболеваний, связанных с свободно радикальной этиологией, таких, как лучевая болезнь, атеросклероз, рак [191]. Особенностью спектров ЭПР классических природных меланинов[192], структурными единицами которых являются индольные фрагменты, независимо от их происхождения, является достаточно постоянная ширина линии около 6 Э. Близкой собственной шириной линии обладают многие бурые угли. ЭПР спектры гумусовых кислот [193], с которыми часто сравнивают полифенолоксикарбоновый комплекс, содержат три сигнала. Это говорит о наличии в них не менее трёх типов ПМЦ. Одна полоса с g-фактором =2.0 и малой шириной H менее 10 Гс, вторая с g-фактором =2.1 и шириной, лежащей в пределах 550-1600 Гс, и третья с g-фактором =4.3 и шириной 120-240 Гс. Первый сигнал отнесён к свободнорадикальному источнику. Анализ этого сигнала у гуминовой (ГК) и фульвовой (ФК) кислот показывает различие интенсивности положительной и отрицательной компонент спектра неочищенных препаратов. Величины отношений равны 1.3 и 4.1 для ГК и ФК соответственно. Асимметрия кривой указывает на анизотропию g-фактора, обусловленную незначительным орбитальным движением свободного электрона в поле с симметрией, ниже кубической. После очистки образцов на катионите, повидимому, удаляются комплексы с искажённым полем и симметрия линий восстанавливается. Известно, что внесение в раствор ФК, ГК и меланинов катионов Fe, Mn, Cu, Ni и ряда других приводит к уменьшению сигнала свободных радикалов. Можно было ожидать, что очистка гумусовых веществ на катионите приведёт к возрастанию этого сигнала, однако наблюдается обратное явление. Выдвинуто предположение о том, что катионы парамагнитных ионов образуют прочные соединения с органическими молекулами и при пропускании через колонку высаживаются в виде комплексов. На удаление свободных радикалов вместе с катионами указывает симбатное уменьшение интенсивности первого сигнала спектра и снижение содержания железа в очищенном образце. Линии с g =4.3 и часть линии с g =2.1 обусловлены железом, входящим в органические комплексы. Уменьшение ширины линий после очистки может быть частично объяснено удалением минеральных примесей, например, монтмориллонита или гетита. Железо в монтмориллоните размещается в тетраэдрах и октаэдрах двух типов: цис– и транс-, различие электрических полей обусловливает разброс значений g. В гетите и монтмориллоните, содержащем железо более 0.1 %, кроме того, наблюдается сильное парамагнитное уширение. Поэтому спектры минералов и исследованных образцов сигналы с g = 2.1 и g = 4.3 имеют большие значения ширины линий. ЭПР спектры ГК кроме сигнала с g=2,0 имеют сигналы от неорганической компоненты, обладающей парамагнитными свойствами.

Проведены исследования древесины, древесины, поражённой чагой, и гриба чаги с помощью ЭПР спектроскопии [194]. Показано, что они состоят из одиночной линии с g-фактором, равным g-фактору свободного электрона, но с различной шириной сигнала. Заболоневая и ядровая древесина имеет ΔН = 10.64 Э, поражённая грибом древесина – ΔН = 8.45 Э, а гриб чага – ΔН = 5.88 Э. Спектр ЭПР гриба чаги отличается высокой интенсивностью сигнала. Концентрация парамагнитных центров (ПМЦ) в чаге достигает 6.6∙10¹⁸ спин/г. При переходе от наружного к срединному слою концентрация ПМЦ снижается примерно на порядок. Меланин имеет такие же параметры спектра ЭПР, как и наружный слой чаги, но интенсивность сигнала возрастает в 1.5 раза. С другой стороны, в литературе отмечается то, что методы выделения и очистки могут существенно влиять на ЭПР спектр исследуемых объектов [193]. Природа ПМЦ в чаге и сигнала ЭПР не изучена. Авторами проведённого исследования высказано предположение о том, что сигнал ЭПР гриба чаги и меланин обусловлен существованием в этих объектах энергетически выгодного равновесия: фенол – семихинон – хинон.

Серия работ посвящена исследованию меланинов, выделенных из природной чаги (ПЧ) и из чаги, выращенной в искусственной культуре (КЧ) [10,11,195]. В этих работах с привлечением различных методов исследования, в том числе и ЭПР, авторы показали различие строения меланинов из ПЧ и КЧ и провели их отнесение к алломеланинам и к эумеланинам соответственно.

В рассматриваемых работах [10,11,195] культивирование гриба чаги проводили на глюкозопептонной среде в колбах на качалке при 25-27 ⁰С в течение 10-15сут. В работе [11] выделение полифенолоксикарбонового комплекса из водного извлечения (ПЧ) проводили хлористоводородной кислотой до рН 2.0. Очистка меланина проводена трижды – растворением в 0.01н гидроокиси натрия и осаждением хлористоводородной кислотой до рН 2.0. Полученный хромоген очищали гельхроматографией на сорбенте Toyopearl HW-65. После диализа меланин был лиофильно высушен. Выделение меланина из КЧ проведено по методике, разработанной авторами этой публикации. Меланин, выделенный из ПЧ, имел молекулярную массу 57 кДа, а выделенный из КЧ – 50 кДа. В обоих образцах меланина зарегистрированы сигналы ЭПР с g= 2.0044, различающиеся шириной линии. Для пигмента из КЧ ΔH = 7.2Гс, концентрация ПМЦ 5,3х10¹⁷спин/г, а для образца из ПЧ ΔH =5.7Гс и концентрация ПМЦ 7.43х10¹⁷спин/г соответственно. Линия спектра имела слегка ассиметричную форму, среднюю между лоренцевой и гауссовой. На основании литературных данных, авторами [11] сделан вывод о том, что такой сигнал ЭПР может расцениваться как идентификационная характеристика чёрных и коричневых меланинов. Помимо центрального идентификационного сигнала, в ЭПР спектре меланина из КЧ были зарегистрированы дополнительные сигналы: широкий сигнал низкой интенсивности с g = 2.064 и H =100 Гс и дополнительный сигнал с g = 2.049 и концентрацией ПМЦ 7,9х10¹⁶спин/г. Наличие дополнительных центров ЭПР поглощения в меланине из КЧ обусловлено различиями в структуре меланинов из ПЧ и КЧ. На основании данных элементного анализа авторами публикации выдвинуто предположение о том, что дополнительные ПМЦ меланина из КЧ обусловлены азотсодержащими структурами, входящими в его состав. Полученные результаты позволили авторам отнести меланин, выделенный из природной чаги, к алломеланинам, а меланин, выделенный из чаги, выращенной в культуре, к эумеланинам.

В работе [10] описано выделение меланина из мицелия КЧ 2 % раствором NаОН в течение 2 ч на кипящей водяной бане. Полученный экстракт подкисляли до рН 2.0 концентрированной НСl, осадок отделяли центрифугированием. Очистку проводили гельхроматографией на сорбенте Toyopearl HW-65 в 0.01н NаОН. Затем меланин был лиофильно высушен. Элементный анализ показал наличие в нём 38.2 % С, 5.54 % Н и следовые количества азота. Молекулярная масса меланина составляет 60 кДа. При этом основная его часть представлена фракцией с молекулярной массой до 50 кДа, а также незначительным количеством фракций с молекулярной массой от 100 до 120 кДа и в несколько сотен дальтон. У исследуемого пигмента зарегистрирован характерный для меланинов несколько ассиметричный синглетный сигнал ЭПР. Концентрация парамагнитных центров 2.93х10¹⁸ спин на 1 г сухого вещества. Интересно отметить то, что при неоднородности по молекулярной массе образца меланина из КЧ [10] дополнительных сигналов в ЭПР спектре, кроме сигнала с g=2,0, не наблюдалось.

В работе [195] исследован меланогенез КЧ и было установлено, что меланины, синтезируемые грибом, выращенным в культуре, отнесены к пирокатехиновому типу.

Хотя меланины, выделенные из КЧ, имеют молекулярные массы, близкие или равные 50кДа, как у меланина из ПЧ, их ЭПР спектры существенно различаются между собой. Один из них [10] похож на ранее описанные, а в другом спектре имеются дополнительные сигналы с g=2,064 и g=2,049 [11], что связывается авторами с изменением органической компоненты комплекса, участием в его формировании азотсодержащих соединений. Значение ширины линии сигнала с g=2,0 у этого меланина из КЧ (с дополнительными сигналами в спектре) возрастает по сравнению с этим параметром у других меланинов и гриба чаги. Это, возможно, также связано с неоднородностью органической компоненты, имеющей азотсодержащие соединения в своей структуре.

Анализ приведенного обзора позволяет сделать вывод о том, что полифенолоксикарбоновый комплекс, выделенный из чаги [194], и меланин из ПЧ [11], прошедший очистку с помощью гельхромотографии и диализа, имеют один сигнал ЭПР спектра с g=2,0, слегка ассиметричной формы. На основании этого можно сделать заключение об одинаковой природе структурных элементов, обеспечивающих парамагнитные свойства изучаемых объектов.

В основном, исследования меланина, согласно приведённым литературным источникам, сводятся к поиску входящих в его состав компонентов. Его структурная организация исследована с применением современных инструментальных методов ИК, электронной и ЭПР спектроскопии, определен размер его частиц.

Дисперсионная среда коллоидной системы водного извлечения чаги

В качестве дисперсионной среды водного извлечения чаги можно рассматривать фильтрат, который остаётся после отделения дисперсной фазы коллоидной системы водного извлечения чаги осаждением её хлористоводородной кислотой. Получаемый таким образом фильтрат представляет собой светло-коричневую жидкость. По данным [9], в фильтрате содержатся в основном зольные элементы, полисахариды, часть свободных ароматических кислот и щавелевая кислота. Согласно [95], в фильтрате остаются полифенольные соединения типа флавоноидов, дубильных веществ до 15 %.

Для более полного исследования веществ, переходящих в фильтрат, в работе [151] его подвергали гидролизу 20 % раствором едкого натра и 10 % раствором соляной кислоты в течение 1, 3 и 5 часов при давлении 1,5 атм. и температуре 180 °C. После нейтрализации, подщелачивания и упаривания полусухой остаток подкисляли соляной кислотой, высушивали с обезвоженным сернокислым натрием и смешивали с асбестом. После этого экстрагировали эфиром в течение 36 часов. Полученный эфирный экстракт обрабатывали вначале 2 % раствором бикарбоната натрия, затем 2 % раствором едкого натра. Были выделены кислотная и фенольная фракции. Затем кислоты и фенолы из водных растворов переводились обратно в эфир путём обработки подкисленных соляной кислотой водных растворов диэтиловым эфиром. Фракцию кислот обрабатывали также хлороформом. Во всех полученных экстрактах определено содержание сухих веществ. Показано, что эфирорастворимых веществ, полученных при щелочном гидролизе фильтрата, в два раза больше (28,30 %), чем при кислотном (14,30 %). В продуктах гидролиза вещества кислотного характера (26,70 %) преобладают над количеством веществ фенольной природы (0,80 %), а также оснований и нейтральных веществ (0,80 %). Щавелевой кислоты в гидролизате содержалось 5,60 %, хлороформрастворимых кислот – 4,00 %, а эфирорастворимых – 16,50 %.

В более поздней работе Г.Л. Рыжовой [8] было показано, что в фильтрате содержится: фенолов – 0,62 %; углеводов – 3,88 % (в % от сухого вещества препарата из чаги).

В работе Калашниковой Е.А. [9] также определено содержание в фильтрате фенолов и углеводов в количестве 0,1 % и 1,88 % соответственно. Столь отличные друг от друга значения могут быть объяснены тем, что изначально водные вытяжки чаги были получены разными способами. С помощью ТСХ были идентифицированы вещества, принадлежащие к различным классам соединений: к фенольным – резорцин и пирокатехин, к ароматическим кислотам – кофейная кислота, к флаваноидам – апигенин и кверцетин, к углеводом – глюкоза и ксилоза.

Мазуркевичем [15] проведено исследование физико-химических характеристик меланина и фильтрата. Кроме того, в составе экстрактивных веществ, извлекаемых из чаги водой, им определено содержание большого количества гидрофобных соединений, в том числе алканов. Автором был получен отвар чаги кипячением сырья в течение 14 часов. После удаления растворителя получен чрезвычайно термостабильный сухой остаток (образец 1). Он теряет воду в интервале температур 100-400 °C (35 % массы образца). Потеря 60 % массы образца происходит к 1000 °C, и в нём остаётся только неорганическая компонента. Обработка образца 1 хлористоводородной кислотой позволяет получить образец 2 – меланин и образец 3 – высушенный фильтрат (после выделения меланина из образца 1). Установлено, что элементный состав сухого остатка (образец 1 – C 46.77 – 49.13, H 3.73 – 3.81, N 0 – 0.06) и меланин (образец 2 – C 57.88 – 59.00, H 4.22 – 4.50, N 0.32 – 0.40, S 0.00 – 003) имеют существенные различия, особенно по содержанию в них азота. На основании анализа ИК спектров образцов 2 и 3 автор делает вывод о том, что образец 2 является меланином. Образец 3, ссылаясь на работу А.Н. Шивриной, он считает мультикомпонентной смесью различных соединений. Однако приведённые В. Мазуркевичем спектры образцов 1, 2 и 3 свидетельствуют о близкой химической природе этих образцов и не указывают, за счет хотя бы частичного разрешения полос поглощения, на их существенное отличие друг от друга. Кроме того, и А.Н. Шиврина[159] и Е.А. Калашникова [9] использовали гидролиз фильтрата (образец 3) для определения соединений, входящих в его состав. Образцы 2 и 3 проэкстрагированы последовательно горячим этилацетатом, затем горячим метанолом, объединены, и после удаления растворителей получен образец 4. Разделение этого образца проведено с помощью колоночной хроматографии. Анализ полученных фракций с помощью масс-спектрометрии позволил идентифицировать следующие соединения: бензальдегид 4,58 мг/г сухого гриба, бензиловый спирт 2,46 мг/г, 2,6– диметоксифенол 1,19 мг/г, 2-(1,4,4-триметилциклогексо-2-ен-1ил)этил ацетат 0,59 мг/г, 4-оксопентановая кислота 0,26 мг/г, ванилиновая кислота 0,21 мг/г, докозан (СН₃ (СН₂)₂₀ СН₃) 0,20 мг/г, гексатриаконтан (n-C₃₆H₇₄) 0,19 мг/г, ретинол 0,13 мг/г, гексадекановая кислота 0,12 мг/г, резорцин 0,14 мг/г, геникозан (С₂₁Н₄₄) 0,11 мг/г, 4гидрокси-4,5диметоксибензойная кислота 0,10 мг/г.

Анализ литературных данных позволяет предположить, что фильтрат, который остаётся после отделения меланина осаждением его хлористоводородной кислотой, не является дисперсионной средой коллоидной системы водного извлечения чаги. Основанием для этого предположения является тот факт, что вещества, найденные в его составе, изучены только после проведения гидролиза, то есть находятся в нём в связанном состоянии. Следовательно, в фильтрате может быть фракция дисперсной фазы коллоидной системы водного извлечения чаги.

Для изменения физико-химических свойств водного извлечения чаги и его дисперсной фазы – меланина, а также увеличения их биологической, антиоксидантной активности разработан и применен ряд воздействий на эти объекты исследования:

1. Изменние дисперсионной среды водного извлечения чаги проведено введением низкомолекулярных веществ, таких, как комплексоны или гидроокись натрия.

2. Разделение коллоидной системы водного извлечения чаги с помощью химического воздействия осуществлено удалением из водного извлечения чаги веществ гидрофобной природы, растворяющихся в органических растворителях.

3. Разделение дисперсной фазы коллоидной системы водного извлечения чаги попеременным применением различных осаждающих агентов.

4. Из физических методов использован электрофорез.

5. Из биотехнологических методов применен гидролиз высокомолекулярных компонентов водного извлечения чаги комплексом ферментов, с обогащением дисперсионной среды низкомолекулярными веществами различной природы.