Текст книги "Диагностический справочник иммунолога"

Глава 3
Группы крови и лекарственные растения

При лечении лекарственными растениями важно учитывать, обладателем какой группы крови является пациент (табл. 54). Так, людям с группами крови 0 (I), В (III) и АВ (IV) из диеты исключают мясные блюда, а обладателям В (III) и АВ (IV) не рекомендуют употреблять кисломолочные и цельные молочные продукты.

Лицам с 0 (I) группой крови рекомендуют пить успокаивающие чаи, настои, отвары и навары, которые благотворно действуют на иммунную систему и пищеварительный тракт. Особенно полезны для них напитки с шиповником, мятой, липой, хмелем.

Для А (II) типа группы крови рекомендуются тонизирующие и стимулирующие чаи.

Особенно показаны чаи и настои из боярышника и женьшеня, а также препараты из листьев алоэ.

Обладатели группы крови В (III) в меньшей степени нуждаются в стимуляторах или успокоительных средствах.

Людям с АВ (IV) группы крови будут полезны настои и отвары из лопуха и ромашки (для стимуляции иммунной системы), боярышника (для сердечно-сосудистой системы).

Таблица 54. Лекарственные растения, рекомендуемые в зависимости от группы крови (Н. Н. Лавров, 2003 год)

Часть VI
Методы исследования иммунной системы

Существующие методы иммунной системы:

1) определение группы крови по системе АВО и резус-фактора;

2) определение неспецифической иммунологической реактивности;

3) оценка специфической реактивности;

4) определе пределенных аутоантител. Это является маркерным признаком самых различных заболеваний.

Современный арсенал иммунологических методов исследования, используемых в клинических и экспериментальных лабораториях, достаточно разнообразен и постоянно совершенствуется.

Глава 1
Определение группы крови по системе аво и резус-фактора

Определение группы крови

Определение проводится с помощью стандартных сывороток, в основе метода лежит реакция агглютинина и эритроцитов пациента с сывороткой, содержащей определенные антитела.

Для каждой группы крови характерен набор агглютиногенов и агглютининов.

Первая группа характеризуется набором в эритроцитах 0 (I): в крови агглютиногены отсутствуют, а в плазме содержатся агглютинины.

Вторая группа А (II) – в эритроцитах содержится агглютиноген А, а в плазме агглютинин-..

Третья группа В (III) – в эритроцитах имеется агглютиноген В, а в плазме агглютинин-..

Четвертая группа АВ (IV) – в эритроцитах содержатся агглютиногены А и В, а в плазме они отсутствуют.

Для определения группы крови берут по 2 стандартные сыворотки (с различными сериями), соответствующие каждой из групп крови. К ним добавляют эритроциты пациента в соотношении 1: 10 (1 капля эритроцитов к 10 каплям сыворотки). Капли тщательно перемешивают покачиванием, затем на 1–2 минуты оставляют в неподвижном виде и затем вновь покачивают в течение 5 минут. После этого проводят оценку результатов.

Определение резус-фактора

Для определения резус-фактора на дно пробирки помещают каплю стандартного реагента (сыворотки анти-Rho (D)) и каплю исследуемой крови.

Все тщательно перемешивают встряхиванием и переворачивают в течение 3 минут. В пробирку добавляют 2–3 мл изотопического раствора натрия хлора и перемешивают путем трехкратного переворачивания пробирок.

Если отмечается агглютинация в виде крупных хлопьев, это указывает на резус-положительную принадлежность, при отсутствии агглютинации реакция считается отрицательной.

При гемотрансфузии, кроме указанных методов, производят определение групповой и резусной совместимости донора и реципиента.

Глава 2
Неспецифическая иммунологическая реактивность

Неспецифическая иммунологическая реактивность определяется с помощью следующих реакций:

– гемолитической активности комплемента;

– определения в сыворотке пропердина;

– определения лизоцина;

– определения интерферона;

– определения миелопероксидазы и НСТ-теста;

– постановки реакции бласттрансформации.

Реакция связывания комплемента (РСК)

Реакция основана на способности комплемента присоединяться только к комплексу «антиген – антитело» и неспособности связываться ни с антигеном, ни с антителом.

Реакция протекает в 2 фазы. В первой фазе участвуют антиген, испытуемая сыворотка и комплемент. Это невидимая часть реакции. Во вторую фазу происходит индикация, в реакцию вводят гемолитическую систему (эритроциты барана и инактивированную гемолитическую сыворотку). Если антиген и антитело являются комплементарными друг другу с формированием комплекса, связывающего комплемент, гемолиз в фазе индикации не происходит, и эритроциты оседают. Реакция считается положительной. В случае если антитело не оказалось специфическим и не произошло образования комплекса «антиген – антитело», свободный комплемент вступает в реакцию и дает гемолиз. Реакция расценивается как отрицательная. В настоящее время реакция ставится в различных модификациях.

Показанием для данного исследования является подозрение на генетические дефекты.

Снижение гемолитической активности комплемента может быть признаком такого заболевания, как системная красная волчанка, или указанием на наличие наследственного дефекта.

Определение уровня пропердина

Пропердин постоянно присутствует в определенных количествах в нормальной сыворотке крови. Это важный гуморальный фактор, участвующий в обеспечении бактерицидных, вируснейтрализующих и гемолитических свойств крови. Метод основан на способности пропердина связываться с различными полисахаридами.

Реакция бласттрансформации на неспецифические митогены

Эта реакция позволяет проводить функциональную оценку Т– и В-лимфоцитов, а также для контролировать использование иммуномодуляторов. Кроме этого, с помощью этой реакции изучается пролиферативный ответ Т-лимфоцитов на неспецифические митогены, исследуется синтез иммуноглобулинов В-лимфоцитами, стимулированных поликлапальным В-клеточным активатором – митогеном лаконоса. Стимуляция синтеза иммуноглобулинов происходит только при взаимодействии Т-хелперов с В-лимфоцитами.

Реакция проводится в динамике с различными дозами митогена и не всегда свидетельствует о нарушении клеточно-опосредованного иммунитета.

Определение С-реактивного белка

Наличие в крови С-реактивного белка зачастую является показателем активности инфекционного процесса. Определение его проводится в реакции презентации с моноспецифической антисывороткой. Для этого капилляр заполняют на треть антисывороткой, затем добавляют аналогичный объем испытуемой сыворотки больного, тщательно перемешивают и инкубируют при температуре 37 °C. Через 2 часа учитывают предварительный результат. Окончательный результат определяют после выдерживания капилляров при комнатной температуре.

Глава 3
Оценка специфической реактивности

В основе лежит определение специфичности взаимодействия реакции «антиген – антитело», которая формирует иммунный ответ на чужеродный агент.

Методы оценки специфической реактивности:

1) определение клеточного иммунитета, Т– и В-лимфоцитов;

2) определение количества иммуноглобулинов;

3) определение циркулирующих иммунных комплексов.

Определение Т– и В-лимфоцитов

Для этого применяется несколько методов. Например, розеткообразование с эритроцитом барана или мыши. Розетка образуется в результате связывания поверхностных рецепторов с введенными в субстрат эритроцитами барана. Она состоит обычно из лимфоцита и 3–5 присоединенных эритроцитов.

Другой метод – метод мононуклеарных антител, для которого используются соответствующие моноспецифические сыворотки, различающиеся в клинической практике по СD-рецепторам:

– СD (3) – Т-лимфоциты;

– СD (4) – Т-лимфоциты хелперы;

– СD (8) – Т-лимфоциты супрессоры;

– СD (16) – WK (натуральные киллеры);

– СD (72) – В-лимфоциты.

Для исследования используются люминесцентный микроскоп и проточный цитометр. По количественному содержанию СD-рецепторов и их соотношению судят о врожденных или приобретенных нарушениях, которые имеют полиэтиологическую природу.

В норме число Т-лимфоцитов составляет 70–80 % от общего числа лимфоцитов периферической крови.

Их снижение отмечается при активности гепатита и системной красной волчанке.

Методы выявления В-лимфоцитов. К ним относятся:

– цитотоксическая реакция с антисывороткой против антигенов;

– иммунофлюоресцентные методы с меченными антисыворотками;

– непрямой метод обнаружения иммуноглобулиновых рецепторов, с использованием стафилококков, содержащих белок А;

– определение с помощью эритроцитов и других частиц;

– смешанный антиглобулиновый тест;

– образование розеток с микробами, покрытыми иммуноглобулинами.

Определение иммуноглобулинов в крови. Определение гуморального иммунитета производится следующими методами:

– радиальная иммунодиффузия в геле с моноспецифическими сыворотками по Манчини;

– нефелометрически с моноспецифическими сыворотками по Чиркину;

– иммуноферментный анализ (ИФА).

С помощью радиальной иммунодиффузии на агаровом геле по Манчини производится количественная оценка содержания JgA, JgM, JgG в сыворотке крови. Это необходимо для диагностики первичной и вторичной иммунной недостаточности, миеломной болезни, а также для проведения контроля иммуномодулирующего лечения.

Сущность метода заключается в том, что лунки агарового геля, содержащего моноспецифическую антисыворотку, заполняют антигеном (в нескольких разведениях с заранее известной концентрацией) и исследуемой сывороткой. Стандартный антиген диффундирует через гель и взаимодействует с антисывороткой, образуя вокруг лунки кольцо преципитации, диаметр которого пропорционален концентрации антигена. График зависимости квадрата диаметра кольца от концентрации антигена представляет собой прямую линию, по которой, зная диаметр кольца исследуемой сыворотки, легко определить концентрацию антигена.

На первом этапе постановки реакции производится подбор оптимальных соотношений моноспецифической антисыворотки и эталонной сыворотки.

На втором этапе определяется количество иммуноглобулинов в исследуемых материалах.

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) широко применяется как в научных исследованиях, так и в практическом здравоохранении с диагностической целью.

Существует несколько вариантов постановки иммуноферментного метода. Иммуноферментные определения, по сравнению с другими исследованиями, имеют ряд преимуществ. К ним относится повышенная чувствительность к выявлению в исследуемом материале антител или антигенов в очень низких концентрациях, причем требуется минимум исследуемого материала (0,5 мл сыворотки обследуемого).

Этапы обследования ИФА.

1. Сорбция на твердую фазу антигена в лунки ИФА-планшета для выявления антител к нему.

2. Выявление специфических антител с помощью биопроб путем внесения в лунки планшета для ИФА.

3. Обеспечение инкубации системы в течение определенного времени, во время которого происходит специфическое взаимодействие антигена и антитела на твердой основе.

4. Внесение различных растворов.

5. Обеспечение появления окрашенного продукта, который можно выявить визуально или фотометрически. Сывороточная концентрация многих аутоантител изменяется во время острых и хронических заболеваний. Синтез аутоантител регулируется по принципу обратной связи с уровнем продукции соответствующих антигенов.

Могут появиться стойкие изменения в наборах аутоантител в соответствии с воздействием определенных антигенов. Ранее выявление подобных изменений в организме может остановить развитие патологического процесса. Для раннего выявления специфических иммунных отклонений в последние годы начали применять методы группы Эли-тест, основанные на твердофазном иммуноферментном анализе.

Существует множество специфических обследований с применением этой методики.

Эли-АИМ-тест выявляет состояние общей активности иммунной системы, ее иммуноактивации и иммуносупрессии. При этом оценивается общая активность иммунной системы посредством определений:

– аутоантител к фрагментам ДНК;

– аутоантител к В2-гликопротеину;

– аутоантител к F c-фрагментам иммуноглобулинов (ревматоидный фактор);

– аутоантител к коллагену;

– аутоантител к миозину.

Большинство этих антител синтезируются в организме человека и освобождают его от продуктов естественного отмирания клеток с помощью «молекул-мусорщиков». Их продукция резко возрастает при инфекционных заболеваниях и снижается при иммуносупрессивных процессах.

Повышение уровня антител проявляется по-разному:

– повышение антител к ДНК – активацией процессов алоитоза;

– повышение антител к В2-гликопротеину – появлением антифосфолипидного синдрома;

– ревматоидный фактор – наличием воспалительного процесса;

– повышение антител к миозину – появлением изменений мышечной ткани в виде миопатии.

Повышение (более +40) антител может указывать на системный иммунопроцесс или онкозаболевание. Низкое их содержание (ниже –40) характеризует иммунодефициты.

Считается, что оценка активности иммунной системы необходима перед проведением профилактических прививок. Это дает возможность исключить вакцинацию у лиц с признаками патологической активации иммунной системы и тем самым избежать возможных поствакцинальных реакций.

При генерализованной иммуноактивации активными становится множество кланов лимфоцитов. Основными симптомами этого состояния являются:

– в течение 2–4 недель повышение продукции различных антител при острых инфекционных воспалительных процессах, а также после профилактических вакцинаций, за которыми следует снижение продукции разных антител (иммуносупрессия);

– повышение продукции антител на длительное время, что наблюдается при аутоиммунных процессах и возникновении злокачественных опухолей роста.

В случае генерализованной иммуносупрессии возникает снижение функциональной активности или гибель большого количества клеток.

Основные признаки генерализованной иммуносупрессии является снижение продукции различных антител, которые возникают на фоне прогрессирующей внутриклеточной вирусной или бактериальной инфекции, а также при различных интоксикациях и конечных стадиях опухолевидных заболеваний.

ЭЛИ-Гамма-тест – с помощью этого исследования определяется сывороточное содержание аутоантител, направленных к гамма-интерферону и его рецепторам. Этим методом определяют динамику тканевых деструктивных процессов в подостром и хроническом периодах заболеваний.

ЭЛИ-ДИА-тест – при данном исследовании выявляется сывороточное содержание аутоантител к инсулину, инсулиновым рецепторам (табл. 55). Повышение аутоантител к инсулину характерно для патологических изменений в В-клетках островков Лангерганса поджелудочной железы. Наличие аутоантител характеризует патологические изменения при диабете I и II типа.

Таблица 55. Антитела к инсулину и его рецепторам

Считается, что избыток блокирующих антител к инсулиновым рецепторам приводит к инсулинорезистентности, а избыток стимулирующих антител к инсулиновым рецепторам – к идиопатической гипогликемии.

Для диабетической нейропатии характерен избыток антител к белку GFAP, а избыток антител к белку AWCA – к диабетической ангиопатии.

Выявленные отклонения дают возможность выбрать наилучшую схему лечения и позволяют оценить ее эффективность.

Эли-Тиро-тест дает возможность выявить изменения продукции и сывороточное содержание маркерных антител, характеризующих патологические изменения в щитовидной железе.

При риске развития дистрофических процессов в щитовидной железе по типу зоба Хомимото определяется повышенное содержание антител к тиреоглобулину.

Лица из групп риска развития аутоиммунного тиреоидита по типу Базедовой болезни с явлениями тиреотоксикоза имеют повышенное содержание антител (более 20) к рецепторам тиреотропина.

Эти показатели дают возможность выбрать оптимальную тактику лечения.

Эли-Тромбо-тест – с помощью этого теста выявляются изменения продукции и сывороточного содержания антител к антигенам тромбоцитов и эндотелия сосудов (табл. 56).

Исследование с помощью этого теста дает возможность оценить сывороточное содержание антител к ряду антигенов мембран тромбоцитов (ТрМ-001-15, ТчМ – 008-10, ТчМ – 015-12), антигену ANCA, выявляемого при васкулитах разного генеза.

Таблица 56. Антитела к антигенам тромбоцитов и эндотелия сосудов

Повышенная агрегация тромбоцитов, сопровождающаяся повышенным уровнем антител к тромбоцитам, обычно сопряжена с повышенным тромбообразованием. Часто при различных заболеваниях это приводит к лизису тромбоцитов, тромбоцитопении и повышенной кровоточивости.

Эли-Кор-тест – данный тест выявляет изменения в содержании кардиотропных антител. На дистрофические изменения в миокарде обычно указывает повышенное содержание антикардиальных антител.

А возникновение повышенного количества антител к белку СоМ-015-15 указывает на тяжелые повреждения, в то время как повышение антител к белку CoS-05-40 только на функциональные изменения, исключая дистрофические.

Для кардиомиопатии и нарушения проводимости метелия сердца характерно повышение антител к .-адренорецепторам.

 Маркерами лиц, относящихся к группе риска внезапной смерти, может быть повышение антител к .-адренорецепторам.

Эли-Гепато-тест выявляет изменения в продукции и сывороточном содержании гепатотропных антител.

Повышение уровня гепатотропных антител обычно указывает на развитие дистрофических, воспалительных изменений в ткани печени при аутоиммунных и вирусных поражениях печени (табл. 57).

Таблица 57. Антитела к антигенам печени

О функциональных изменениях в печени свидетельствуют изменения, происходящие в антителах к цитоплазматическим антигенам HeS-08-300, HeS-08-40. Стойкие деструктивные изменения в печени характеризуются содержанием антител к мембранным белкам митохондрий и являются индикатором деструктивных процессов в печени.

Все это дает возможность оценить эффективность терапии при заболеваниях печени.

При латентном вирусоносительстве значительных изменений в содержании антител не возникает.

Эли-Нефро-тест – это исследование выявляет изменения в продукции нефротропных антител, а также в их содержании в сыворотке.

Повышение антител к антигенам почечной ткани, обычно указывает на развитие воспалительных, дистрофических процессов в почках.

О функциональных отклонениях со стороны почек, не сопровождающихся деструктивными процессами, свидетельствуют изменения количества антител к цитоплазматическому антигену KiM-05-40. Стойкие изменения в количестве антител к мембранным белкам KiM-05-300 и KiM-05-40 говорят о деструктивных процессах в почках.

Эли-Пульмо-тест применяется с диагностической и прогностической целью, он определяет изменения в содержании и продукции пульмотропных антител (табл. 58). Изменения пульмотропных антител характерны для хронической пневмонии, воспалительных процессов и злокачественных новообразований. Повышение антител обычно характерно для дистрофических изменений в легких в легких.

Таблица 58. Антитела к антигенам легких

Эли-Гастро-тест и Эли-Интест-тест позволяют выявить изменения в продукции и сывороточном содержании антител, которые взаимодействуют с антигенами стенок желудка и тонкого кишечника (табл. 59).

Повышение содержания гастро– и интестинотропных антител указывает обычно на наличие дистрофических процессов в стенках желудка и кишечника, при язвенных процессах на слизистых оболочках желудочно-кишечного тракта.

Таблица 59. Антитела к антигенам желудка и кишечника

Эли-Н-тест дает возможность выявить изменения в сывороточном белке содержания нейротропных антител, которые наблюдаются при травмах, инсультах, гипоксии мозга, отравлениях и других процессах, ведущих к нарушению функции нервной системы.

Этот метод выявляет отклонение содержания следующих антител:

– к белку S-100, который характеризует состояние серотониновых нейронов;

– к белку GFAP, регулирующему водно-электролитный баланс тканей мозга;

– к белку МР-55, регулирующему межклеточную адгезию;

– к белку нейроферментов – белка аксонов;

– к белку нейромедиаторов (глютамат, ГАМК, дофамин, серотонин).

Эли-ОБМ-тест выявляет изменения в содержании антител, которые взаимодействуют с основным белком миелина (табл. 60).

Таблица 60. Антитела к основному белку миелина

Повышение уровня a-антител к основному белку миелина возникает при нейропатии различного генеза, которая часто сопровождается повреждением миелиновой оболочки нервных волокон. Антимиелиновые процессы характерны для острого нарушения мозгового кровообращения. При рассеянном склерозе отмечается хронический активный демиелитизирующий процесс, который характеризуется постоянным повышением уровня a-антител к основному белку миелина, при обострениях характерны волнообразные изменения их содержания.

Эли-СПР-тест – этот метод выявляет отклонения в продукции и содержании аутоантител, которые взаимодействуют с мембранными антигенами сперматозоидов при изменениях в предстательной железе и бесплодии (табл. 61).

Таблица 61. Аутоантитела к белкам сперматозоидов

Чаще всего антиспермальные антитела достигают высокого уровня при урогенитальных инфекциях как у мужчин, так и у женщин. Резкое повышение уровня антиспермальных антител является причиной мужского и женского бесплодия.

В настоящее время факторы клеточного и гуморального иммунитета иммунологические лаборатории определяют с по мощью автоматизаторов. Аппарат «FACS Can» определяет факторы клеточного иммунитета, аппарат «Behring Neophelomeir 11» используется для исследования факторов гуморального иммунитета, аппарат «Uni CAP-100» выявляет многочисленные факторы аллергии.