Текст книги "Медицинская микробиология: конспект лекций для вузов"

Вопрос 75. Возбудитель проказы

1. Морфология, биология микобактерии лепры

Проказа – заболевание, вызываемое микробом рода микобактерий – Micobacterium leprae (палочка Хансена). Различают 5 клинических форм болезни:

полярную туберкулоидную,

пограничную туберкулоидную,

недифференцированную,

пограничную лепроматозную,

полярную лепроматозную.

Лепроматозная (узловая) форма, характеризуется разрастанием в слизистых оболочках и в коже грануляционной ткани, составляющей основу так называемых лепром, в последних имеется значительное количество кислотоупорных микобактерий в коже, в лимфатических узлах, в слизи носа, зева.

Морфология и биология лепры. Возбудитель проказы по морфологии сходен с туберкулезной палочкой. Это прямая или слегка изогнутая микобактерия, сплошная или зернистая, которая легче, чем туберкулезная, окрашивается фуксином (без подогревания) и легче обесцвечивается кислотами и щелочами. Грамположительна. В лепрозных узлах (лепромах) палочки Хансена встречаются в громадном количестве, лежат значительными скоплениями в виде «связок сигар».

Многократные попытки выращивания микробактерии проказы на питательных средах заставляют сомневаться в возможности получения культур микробактерий лепры вне тканей человека. На глицериновом плацентарном агаре, возбудители лепры медленно растут в виде складчатого или влажного налета или пленки, бульон равномерно мутнеет.

Биологическую пробу нельзя воспроизвести – экспериментальные животные не восприимчивы к лепре.

По характеру бактерии выделенных культур можно разделить на три типа:

кислотоустойчивые микробактерии, непатогенные для всех видов животных;

кислотоустойчивые микробактерии, растущие только в первичной культуре;

микробактерии некислото– и слабокислотоустойчивые.

2. Лабораторная диагностика проказы

Микроскопическое исследование. Диагноз ставят на основании бактериоскопического исследования слизи из носа или тканевой жидкости из кожных поражений. Положительные находки подкрепляют диагноз. При отрицательном результате делают биопсию пораженных участков и производят исследования отпечатков их или гистологических срезов. В лепрозных поражениях имеются очень характерные «лепрозные клетки», овальные или круглые, заполненные кислотоустойчивыми бактериями. Большие сильно раздутые клетки с бактериями носят название «лепрозных шаров». Гигантские клетки в лепромах не обнаруживаются.

Лепрозные микробактерии приходится дифференцировать с туберкулезными на основании более легкой окрашиваемости лепрозных микробактерий и более легкой их обесцвечиваемости спиртом и кислотами после окраски. Одним из наиболее употребляемых является способ Баумгартена – окрашивают мазок фуксином без подогревания, обесцвечивают в течение 30 мин в азотнокислом спирте, промывают в воде и докрашивают водным раствором метиленового синего. Срезы лепром окрашивают в том же растворе фуксина в течение 12–15 мин, обесцвечивают полминуты в азотнокислом спирте, промывают в воде и докрашивают метиленовым синим. В старых лепромах палочки лепры окрашены в красный цвет; в свежих поражениях микробактерий частью синие, частью красные. Туберкулезные микобактерии этим методом обычно не прокрашиваются.

Аллергическая реакция – для подтверждения диагноза проказы применяют аллергическую пробу с лепромином (реакция Митсуда). Лепромин приготовляют из биопсированных тканей больных проказой. Через 8—24 ч после введения в кожу лепромина развивается инфильтрат с гиперемией. Однако проба Митсуда недостаточно специфична, хотя и очень распространена.

Вопрос 76. Возбудитель сапа

1. Морфология возбудителя сапа

Сап – заразное заболевание цельнокопытных (лошадь, осел, мул), протекающее преимущественно в хронической форме и передающееся человеку. В органах (лимфатические узлы, легкие, печень и др.) изменения возникают в виде типичных санных узелков различной величины.

Морфология возбудителя (Pseudomonas mallei) – палочка с закругленными концами, длиной 1–5 мкм с характерным зернистым строением. Бактерия полиморфна: может иметь коккообразные, вздутые формы; микроб часто располагается нитями, принимает вид палочек с неправильными контурами. Нити из бактерий средней длины, состоят обычно из 4–8 члеников.

Обнаружены фильтрующиеся формы, которые при пассаже на животных восстанавливаются в типичные формы. Палочка сапа грамотрицательна, окрашивается водно-спиртовыми растворами анилиновых красок со щелочными растворами, со щелочными протравами. Наблюдаются биполярные и неравномерно окрашенные палочки. При электронной микроскопии видны светлые участки протоплазмы и плотные гранулы. Спор и капсул палочка не образует. Является факультативным аэробом.

2. Биология, культуральные свойства

Микроб неприхотлив к питательным средам. Его выращивают на мясопептонном агаре и бульоне, картофеле. Рост на средах значительно усиливается при прибавлении к ним до 5 % глицерина. Температурный оптимум 37 °C, ниже 20 °C и выше 45 °C сапная палочка не развивается. Микроб хорошо растет при слабокислой, нейтральной и слабощелочной реакции среды.

Картофельная среда считается дифференцирующей. Рост возбудителя сапа особенно характерен: к 3 дню образуется равномерной слизистый янтарно-коричневый, медообразный налет, матовый или часто блестящий. К 6—8-му дню янтарная просвечивающая культура приобретает красноватый оттенок, прозрачность налета теряется. На мясопептонном агаре с 2 % глицерина рост микроба обычно начинается через сутки. Сенная культура на агаре представляет вначале просвечивающий серовато-белого цвета налет с перламутровым блеском слизистой и вязкой. В мясопептонном бульоне с 2–4 % глицерина сначала возникает равномерная муть, затем выпадает слизистый серо-белый осадок, поднимающийся при легком встряхивании пробирки. К 10-му дню на поверхности появляется сероватая слизистая пленка. Сенный микроб свертывает молоко медленно, чаще на 6—8-й день. Желатину не разжижает, протеолитическое действие выявляется лишь при малых концентрациях желатины. Сапная палочка развивается также на безбелковых синтетических средах, в которых источниками азота и углерода служат аммонийные соли органических и угольной кислот. Индол не образуется. Лактозу и глюкозу расщепляет с выделением кислоты без газообразования.

3. Патогенность и вирулентность

Палочки патогенны для цельнокопытных животных. Лошадей удается заражать подкожно и путем скармливания малыми количествами сапной культуры. Лошади часто болеют хронической формой сапа. Крупный рогатый скот, овцы и козы в естественных условиях сапом не болеют.

Весьма резистентны к сапу свиньи, птицы, крысы. Из лабораторных животных сапом заражаются морские свинки, при подкожном заражении они гибнут спустя 10–15 дней, иногда даже через 2–3 мес. В качестве лабораторного животного можно использовать кошку, которая очень чувствительна к заражению. Сап у нее протекает в форме септицемии. Кролики мало восприимчивы, несколько более чувствительны молодые животные. Белая мышь сапом не заражается.

4. Устойчивость во внешней среде

Палочка сапа во внешней среде довольно устойчива: в воде, почве сохраняется до 1,5 мес, в выделениях больных, трупах животных, павших от сапа – несколько недель. В замороженных материалах сапный микроб весьма устойчив. Быстро гибнет при нагревании (при температуре 55^°С в течение 10 мин, при кипячении через несколько минут). Высушивание ведет к гибели микроба через 1–2 недели, губительно действуют на него ультрафиолетовые лучи. Палочка чувствительна к воздействию дезинфицирующих веществ (хлорная известь, формалин, щелочи, марганцевокислый калий, сулема).

5. Лабораторная диагностика сапа

Лабораторная диагностика сапа – материалом для исследования могут служить:

стерильно взятые носовые выделения,

гнойное отделяемое язв,

пунктаты подкожных абсцессов,

кусочки органов из трупа,

лимфатические узлы.

Консервирование материала возможно 30 %-м стерильным глицерином.

Микроскопическое исследование – микроскопия мазков из патологического материала ввиду отсутствия специфических методов окраски бактерии сапа имеет ограниченное диагностическое значение, но важна для исключения других возбудителей. Мазок окрашивают по Граму и по Романовскому-Гимзе.

Бактериологическое исследование – посевы материала производят на глицеринизированный картофель, мясопептонный агар и бульон. На картофельно-глицериновой среде через 3–4 дня наблюдается характерный рост возбудителя сапа в виде янтарно-коричневого цвета слизистого налета. К 6—8-му дню культура становится мутной, красноватого оттенка. Чистую культуру получить не всегда удается, так как посторонняя флора препятствует росту палочки сапа. При хроническом сапе бактериологическое исследование часто дает отрицательный результат. Для идентификации возбудителя учитывают его:

биохимические свойства,

агглютинабельность,

патогенность для лабораторных животных.

Биологической пробой заражаются морские свинки (самцы), хомяки, кошки. Исследуемый материал можно вводить подкожно (если он не загрязнен), но более надежно внутрибрюшное заражение. Через 3–5 дней у зараженного самца развивается орхит. Через 8—15 дней большая часть свинок погибает. На высоте заболеваний свинок забивают и производят бактериологическое исследование органов и тканей.

Серологическое исследование – основным методом исследования реакция связывания комплемента (РСК), реакцию пассивной гемагглютинации. РСК более чувствительна. Исследование проводят в динамике с учетом нарастания титра антител. При хроническом сапе РСК нередко бывает отрицательной.

Аллергическая проба имеет важное значение для подтверждения диагноза сапа. Внутрикожно или накожно на предплечье вводят 0,1 мл маленна (фильтрат 4-недельной бульонной культуры палочки сапа, разведенной в 100 раз). В положительном случае через 24–48 ч на месте введения маленна появляется гиперемия, припухлость, болезненность. При этом может наблюдаться общая реакция в виде недомогания, повышение температуры тела. Проба становится положительной с 10—15-го дня болезни.

Вопрос 77. Возбудитель лейшманиоза

1. Характеристика лейшманий

Лейшманиоз – это протозойное трансмиссивное заболевание человека и животных, при котором поражаются внутренние органы (внутренний лейшманиоз) или кожа и слизистые оболочки (кожный лейшманиоз).

Возбудители относятся к семейству трипаносом, роду лейшманий – паразиты из класса жгутиковых. Жизненный цикл лейшманий протекает со сменой хозяев в виде двух стадий:

амастиготной (безжгутиковой) в организме позвоночного животного и человека,

промастиготной (жгутиковой) – в организме членистоногого (москитов).

2. Забор материала

Материал для исследования; отбор проб. При исследовании появившихся бугорков при кожном лейшманиозе протирают кожу спиртом и производят укол по направлению к середине бугорка. Из выступившей капли серозно-кровянистой жидкости готовят на предметных стеклах мазки, высушивают, фильтруют и окрашивают по Романовскому. При исследовании язвы с обильным отделяемым материал для исследования с поверхности брать не рекомендуется, так как обильная бактериальная флора и большое количество распавшихся клеток затемняют картину, поэтому материал берут путем пункции в приподнятый неизъязвившийся край язвы по направлению ко дну язвы. Из содержимого готовят мазки, высушивают, фиксируют и окрашивают по Романовскому. При внутреннем лейшманиозе исследованию подвергают пунктат костного мозга или усиленного лимфатического узла.

3. Микроскопическое исследование

Микроскопическое исследование – окрашенные мазки исследуют с иммерсионной системой. В мазках обнаруживаются лейшманиальные формы паразита. Эти стадии паразита имеют сферическую или чаще овоидную форму. Размер 2–6 мкм, ядро одно, лежит в середине клетки, около ядра находится протопласт в виде короткой палочки или крупного кокка. По Романовскому цитоплазма окрашивается в голубой цвет, ядро – в красный, блефаропласт – в вишнево-красный более темный цвет, чем ядро. Паразиты наблюдаются в препарате как свободно лежащими, так и в цитоплазме больших одноядерных клеток типа макрофагов и других ретикуло-эндотелиальных клеток.

4. Бактериологическое исследование

Бактериологическое исследование – серозно-кровянистую жидкость из язвы вносят на среду ННН (агар + поваренная соль + дефибринированная кровь кролика).

Засеянные пробирки выдерживают при температуре 22–25 °C. Для предотвращения высыхания среды ватные пробки пробирок заливают горячим парафином. Рост в виде мелких прозрачных колоний, впоследствии сливающихся, обнаруживаются на 3—4-й день. Без пересева культуру можно сохранить 3–4 недели и дольше. При посеве с поверхности агара петлей снимают отдельные колонии и засевают в пробирки со свежей средой на поверхность агара. В культуре лейшмании представлены в виде лептомонадных форм. Они имеют удлиненное ланцетовидное тело размером 10–14 х 4–5 мкм с ядром в средней части тела и блефаропластом, лежащим около переднего конца тела паразита. От блефаропласта, начинается свободно выходящий через передний конец тела клетки жгут, в 1,5 раза длиннее тела паразита. Часть лептомонадных форм часто собирается в розетки (жгутами к центру) по 10–15 экземпляров. В старых культурах наблюдаются формы, лишенные жгута, в виде овальных, иногда круглых образований размером 4х5 мкм.

Серологические исследования – используются реакция связывания комплемента (РСК), иммуноферментная агглютинация (ИФА).

5. Биологическая проба

Биологическая проба – возбудитель кожного лейшманиоза (мокнущая форма) человека может быть экспериментально привит белым мышам, песчанкам и хомякам. У последних часто развивается генерализованная инфекция. Материалом для заражения служат клетками из язвы или из культуры. Лейшманий из культуры вводят внутрикожно. Через 10–20 дней на месте введения лейшманий развивается инфильтрат, содержащий стадии паразита.

Вопрос 78. Возбудители медленных вирусных инфекций

1. Характеристика медленных вирусных инфекций

Для медленных инфекций характерны:

необычно продолжительный инкубационный период;

медленно прогрессирующий характер течения процесса;

своеобразие поражения органов и тканей;

смертельный исход.

Медленные вирусные инфекции регистрируются у человека и животных и характеризуются хроническим течением. Медленная инфекция связана с персистенцией вируса, характеризующейся его своеобразным взаимодействием с организмом хозяина, при котором несмотря на развитие патологического процесса, как правило, в одном органе или в одной тканевой системе имеет место многомесячный или даже многолетний инкубационный период, после которого медленно, но неуклонно развивается симптомы заболевания, всегда заканчивающегося летально.

Факторы, обусловливающие развитие медленно протекающих инфекций, окончательно не выяснены. Считают, что эти заболевания могут возникать в результате нарушения иммунологической реактивности, сопровождающейся слабой продукцией антител и выработкой антител, не способных нейтрализовать вирус. Возможно, что дефектные вирусы, длительно персистирующие в организме, вызывают пролиферативные внутриклеточные процессы, приводящие к развитию медленно протекающих заболеваний у людей и животных.

Вирусный характер «медленных вирусных инфекций» подтверждает изучение и характеристику этих агентов:

способность проходить через бактериальные фильтры с диаметром от 25 до 100 нм;

неспособность размножаться на искусственных питательных средах;

воспроизведение феномена титрования (гибель зараженных особей при высокой концентрации вируса);

способность первоначально репродуцироваться в селезенке и других органах ретикулоэндотелиальной системы, а затем в мозговой ткани;

возможность адаптации к новому хозяину, нередко сопровождающаяся укорочением инкубационного периода;

генетический контроль чувствительности некоторых хозяев(например у овец и мышей);

специфический круг хозяев для данного штамма возбудителя;

изменение патогенности и вирулентности у разных штаммов для различного круга хозяев;

возможность клонирования (селекция) штаммов из дикого типа;

возможность персистенции в культуре клеток, полученных из органов и тканей зараженного организма.

2. Заболевания, вызываемые вирусом кори

Возбудителями медленных вирусных инфекций иногда могут быть обычные вирусы (вирусы кори, краснухи и др.). Вирусы кори и краснухи могут вызывать соответственно:

подострый склерозирующий панэнцефалит;

врожденную краснуху.

Подострый склерозирующий панэнцефалит (ПСПЭ) – медленная вирусная инфекция детей и подростков, характеризующаяся поражением ЦНС и выражающаяся в медленно прогрессирующем распаде интеллекта, двигательных расстройствах, появление ригидности и всегда заканчивающаяся летально.

Вирионы кори сферической формы, имеют диаметр 150–500 нм и нуклекапсид в виде спирали. Вирус обладает гемолизирующей, гемагглютинирующей активностями. К вирусу чувствительны хомячки, африканские хорьки, менее чувствительны обезьяны и мыши. Ученые пришли к выводу о том, что при ПСПЭ большая часть вирусов кори персистирует как делеционный мутант.

Врожденная краснуха – медленная вирусная инфекция, характеризующаяся внутриутробным заражением плода и развитием вирусной персистенции в его тканях, обусловливающей медленно прогрессирующее поражение органов, что приводит к формированию тяжелых аномалий и пороков развития этих органов.

Вирус краснухи представляет собой сферические частицы диаметром 50–70 нм, внутри которых заключена электронно-плотная сердцевина диаметром 30 мм. Снаружи вирион покрыт редкими ворсинками с утолщениями на концах. Вирусная оболочка богата липидами.

Вирус очень чувствителен к эфиру, ацетону, этанолу, также к ультрафиолетовым лучам, формалину. Вирус отличается относительной термолабильностью. Вирус краснухи, кроме инфекционной, обладает гемагглютинирующей, комплементсвязывающей активностью, а также способен к агрегации тромбоцитов. Вирус размножается в организме приматов и многих мелких лабораторных животных (хорьки, кролики и крысы). Следствием врожденной краснухи является прогрессирующий краснушный панэнцефалит – медленная вирусная инфекция, характеризующаяся комплексом постепенно прогрессирующих нарушений двигательной и умственной функции ЦНС и завершающаяся смертельным исходом.

К медленно протекающим инфекциям относят также:

лихорадку Ласса,

бешенство,

рассеянный склероз,

амиотрофический боковой склероз,

болезнь Паркинсона,

прогрессирующую многоочаговую лейкоэнцефалопатию,

прогредиетную форму клещевого энцефалита,

синдром приобретенного иммунодефицита,

лимфоцитарный хориоменингит.

Вопрос 79. Прионные медленные инфекции

1. Характеристика прионов

Медленные инфекции могут развиваться в результате действия не только обычных вирусов, таких, как вирусы кори, краснухи и другие, но и инфекционных белковых частиц – прионов. Прионы отличаются от обычных вирусов рядом свойств.

Прионы являются инфекционными белками с низкой молекулярной массой, не имеют нуклеиновых кислот, не вызывают воспаления и иммунного ответа, устойчивы к высокой температуре, формальдегиду, к различным видам излучений. Белок приона кодируется генами организма-хозяина, которые, как полагают, содержится в каждой клетке и находятся в репрессированном состоянии. Прионы имеют ряд свойств, характерных для обычных вирусов. Они имеют ультрамикроскопические размеры, не культивируются на искусственных питательных средах, репродуцируются только в клетках до высоких титров, имеют штаммовые различия и др.

Инфицирование прионами происходит в результате поступления в организм (с пищей, через кровь или при трансплантации некоторых тканей) изоформы белковой молекулы приона. Они попадают от больных сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, овцы и др.) при употреблении недостаточно термически обработанного мяса, субпродуктов, или от людей при ритуальном каннибализме, когда поедается мозг умерших родственников (как дань уважения к погибшему члену клана) – у аборигенов Новой Гвинеи. Изоформы приона, попав в организм, депрессируют ген, кодирующий синтез приона, в результате чего происходит накопление прионов в клетке, ведущее к губкообразному перерождению, разрастанию глиальных клеток, накоплению мозгового амилоида. Поражение клеток центральной нервной системы вызывает характерные клинические проявления, так называемые подострые губкообразные энцефалопатии.