Читать книгу "Анализы. Актуальные сведения по лабораторным исследованиям под рукой"

Глава 7
Исследование мочи

Для исследования собирают всю порцию утренней мочи после тщательного туалета половых органов. Мочу необходимо собирать в совершенно чистую, сухую посуду; хранить до исследования можно не более 1,5 ч в холодном месте. Длительное стояние ее ведет к изменению физических свойств, размножению бактерий и разрушению элементов осадка мочи. Применение консервирующих веществ нежелательно, но допускается в виде исключения, если анализ не может быть произведен в положенное время. Для проведения обычных тестов подходит произвольно взятая порция мочи. При подозрении на диабет исследуют порцию мочи через 2 ч после приема пищи. При подозрении на нефрит собирают утреннюю порцию, так как она имеет более высокую плотность и более низкий рН. При сборе суточной мочи утром освобождается мочевой пузырь, а затем ее собираю 24 ч в стеклянный сосуд.

Физические свойства мочи

Количество

Количество выделяемой за сутки мочи (диурез) в норме у взрослых колеблется от 1000 до 2000 мл, составляя в среднем 50–80 % принятой жидкости. Дети в зависимости от возраста выделяют меньшее количество мочи. Ее суточное количество можно вычислить по формуле:

600 + 100 (х – 1)= мл за 24 ч,

где х – число лет ребенка от 1 года до 10 лет.

Количество выделенной мочи является показателем не только функционального состояния аппарата мочеотделения. На суточный диурез влияет ряд экстраренальных факторов. Диурез увеличивается при приеме большого количества жидкости, при употреблении пищевых веществ, повышающих диурез (арбуза, тыквы и др.). Ограничение приема жидкости, усиленное потоотделение, понос, рвота ведут к уменьшению диуреза. В патологии полиурия (свыше 2000 мл) наблюдается при заболеваниях почек (хронические нефриты и пиелонефриты, в период уменьшения отеков у почечных больных и др.), при сахарном диабете, алиментарной дистрофии и пр. Олигурия наблюдается при заболеваниях почек (острых диффузных нефритах), недостаточности кровообращения, повышенной гидрофильности тканей, задержке натрия в тканях и пр.

Анурия может быть следствием тяжелого поражения почечной паренхимы (при острых диффузных нефритах), почечнокаменной болезни (закупорка мочеточников). В результате болевых раздражений может возникнуть рефлекторная анурия. Длительная анурия (свыше 5–7 суток) ведет к уремии.

Ишурия – задержка мочи в мочевом пузыре при невозможности самостоятельного мочеиспускания. Причиной этого могут быть: аденома или рак предстательной железы, воспаление простаты, стриктуры уретры, закупорка камнем выхода из мочевого пузыря.

Количество утренней мочи (обычно 150–250 мл) не дает представления о суточном диурезе. Измерение объема утренней мочи целесообразно для интерпретации ее относительной плотности.

Цвет

Цвет нормальной мочи колеблется от светло-желтого до насыщенно-желтого. Окраска мочи в норме зависит от содержания пигментов урохрома, уроэретрина, уророзеина и др. Интенсивность окраски меняется параллельно с удельным весом и количеством выделенной мочи.

Моча насыщенно-желтого цвета обычно концентрированная, имеет высокий удельный вес и выделяется в небольшом количестве. Бледная моча чаще имеет низкий удельный вес, что наблюдается при полиурии.

В патологии цвет мочи может быть от зеленовато-желтого до коричневого в присутствии желчных пигментов; красный, бурый, красновато-желтый – от примеси крови, гемоглобина; темно-бурый и черный – при меланозах, алкаптонурии.

Цвет мочи может изменяться после приема медикаментов: красный или розовый цвет обусловливают пирамидон, антипирин, сульфонал; темно-бурый и черный – салол, нафтол и другие; синеватый – метиленовый синий; зеленовато-желтый и коричневый – ревень, александрийский лист и др.

Запах

Запах мочи особого диагностического значения не имеет. Свежевыделенная нормальная моча – без запаха. При стоянии мочи появляется аммиачный запах. В свежевыделенной моче аммиачный запах наблюдается при циститах, пиелитах, пиелонефритах и др. Резко зловонная моча наблюдается при употреблении в пищу чеснока, хрена. Наибольшее диагностическое значение имеет запах мочи у больных диабетом. В случае появления у них ацетоновых тел в моче отмечается «плодовый» или «яблочный» запах.

Прозрачность

В нормальной моче все составные части находятся в растворе, поэтому свежевыделенная моча совершенно прозрачна. Если моча оказывается мутной в момент выделения, то это обусловлено наличием в ней большого количества клеточных образований, солей, бактерий, жира.

Ориентировочно установить причину помутнения можно следующим образом: если при нагревании 4–5 мл мочи в пробирке она становится прозрачной, то помутнение было вызвано мочекислыми солями (уратами); если степень помутнения после нагревания не изменяется, то к моче прибавляют 10–15 капель уксусной кислоты, полное или даже частичное исчезновение мути после этого говорит о том, что она была вызвана фосфатами.

Помутнение, исчезающее при добавлении соляной кислоты, вызвано оксалатом кальция. Муть, обусловленная присутствием жира, исчезает при взбалтывании мочи со смесью эфира и спирта. Если моча остается мутной, несмотря на все эти процедуры, то муть, по всей вероятности, вызвана микробами, что распознается при микроскопическом исследовании (табл. 33).

Таблица 33

Изменение цвета мочи в зависимости от различных причин

Реакция мочи

Определение рН при помощи лакмусовой бумаги

Определение рН при помощи лакмусовой бумаги следует проводить одновременно двумя ее видами – синей и красной.

Трактовка результатов следующая: если синяя лакмусовая бумага краснеет, а красная не изменяет своего цвета – реакция кислая; если красная лакмусовая бумага синеет, а синяя не изменяет своего цвета – реакция щелочная; если же оба вида бумаги не меняют своего цвета – реакция мочи нейтральная.

Моча здоровых взрослых людей при обычном питании имеет средние значения рН 6,25 (от 5,0 до 7,0). Колебания рН мочи обусловлены составом питания: мясная диета обусловливает кислую реакцию мочи, растительная диета – щелочную.

В норме при смешанной пище в организме образуются главным образом кислые продукты обмена. Основания попадают в организм при приеме щелочных лекарств и питании богатой основаниями пищей (овощами, фруктами, молочными продуктами). Излишнее количество бикарбонатов выводится почками, при этом моча становится щелочной.

Органические кислоты и кислые соли неорганических кислот, содержащиеся в моче, диссоциируют в водной среде, выделяя известное количество свободных Н⁺. Концентрация (активность) свободных Н⁺-ионов представляет истинную реакцию мочи – активную кислотность (рН).

Щелочность мочи увеличивается при рвоте, особенно при высокой кислотности желудочного сока, ощелачивающей терапии, хронической инфекции мочевыводящих путей. Кислотность увеличивается при сахарном диабете, туберкулезе почек, почечной недостаточности.

Изменение рН мочи соответствует изменениям рН крови; при ацидозах моча имеет кислую реакцию, при алкалозах – щелочную.

Однако иногда наблюдается расхождение этих показателей. При хронических поражениях канальцевого аппарата почек в крови отмечается картина гиперхлоремического ацидоза, а реакция мочи щелочная, что связано с нарушением синтеза кислоты и аммиака в связи с поражением канальцев.

При гипокалиемическом алкалозе наблюдается ацидурия. Недостаток калия увеличивает секрецию Н+-ионов канальцами. В данной ситуации это физиологический ответ почечных канальцев, направленный на поддержание ионного равновесия между клетками и межтканевой жидкостью. Таким образом, определение рН мочи может иметь значение при дифференциальной диагностике алкалоза и ацидоза разной этиологии.

Унифицированный метод определения рН мочи с индикатором бромтимоловым синим

Необходимые реактивы

Бромтимоловый синий (31, 311-дибромтимолсульфофталеин) – 0,1 г растертого в фарфоровой ступке индикатора растворяют в 20 мл теплого этилового спирта и после охлаждения до комнатной температуры доводят водой до 100 мл.

Ход исследования

Исследуют мочу в первые 2–3 ч после мочеиспускания. К 2–3 мл мочи добавляют 1–2 капли рабочего раствора индикатора. Границы изменения окраски индикатора лежат в диапазоне значений рН 6,0–7,6; этот диапазон обеспечивает определение кислой и щелочной реакций. Желтый цвет соответствует кислой реакции, бурый – слабокислой, травянистый – нейтральной, буровато-зеленый – слабощелочной, зеленый и синий – щелочной. Практическое выполнение этой реакции очень просто и при большом количестве исследований значительно экономит время. Однако этот метод дает только ориентировочное представление о кислой или щелочной реакции, отличить мочу с нормальной кислотностью от патологически кислой не представляется возможным.

Универсальная индикаторная бумага также дает возможность определить рН (значения даны с интервалом 1,0 в широком диапазоне – от 1,0 до 10,0). Кроме того, некоторыми фирмами выпускаются специальные виды индикаторной бумаги, предназначенные для определения рН мочи (диапазон значений рН 5,0–8,0), или комбинированные экспресс-тесты, которые включают, кроме определения величины рН, несколько других показателей.

Относительная плотность мочи (удельный вес)

Относительная плотность мочи зависит от концентрации растворенных в ней веществ (белка, глюкозы, мочевины, солей натрия и др.). Каждые 3 г/л белка повышают относительную плотность мочи на 0,001, а каждые 10 г/л глюкозы увеличивают цифру плотности на 0,004. Цифры плотности утренней мочи, равные или превышающие 1,018, свидетельствуют о сохранении концентрационной способности почек и исключают необходимость ее исследования с помощью специальных проб. Очень высокие или низкие цифры плотности утренней мочи требуют выяснения причин, обусловивших эти изменения. Низкая относительная плотность связана с полиурией, а высокая при объеме утренней мочи 200 мл и больше чаще всего бывает при глюкозуриях.

Определение удельного веса мочи

Принцип метода определения удельного веса мочи – сравнение плотности мочи с плотностью воды при помощи ареометра (урометра) с диапазоном шкалы от 0,001 до 1,050.

Необходимое оборудование

1. Цилиндр вместимостью 50 мл.

2. Урометр.

Ход исследования

Мочу наливают в цилиндр, избегая образования пены, затем в нее осторожно погружают урометр. После прекращения его колебаний отмечают относительную плотность по положению нижнего мениска на шкале урометра. Урометр не должен касаться стенок цилиндра. Температура исследуемой мочи должна быть 15 ± 3 °C. Если мочи мало, то можно перед исследованием развести ее в 2–3 раза дистиллированной водой, а потом полученную цифру относительной плотности умножить на степень разведения.

Тестирование мочи с помощью экспресс-полосок

Экспресс-анализ мочи производится с помощью диагностических наборов инертных пластиковых полосок, на которых расположены бумажные подложки с наложением химических реактивов.

Показатели мочи, определяемые с помощью диагностических полосок:

1) глюкоза;

2) билирубин;

3) уробилиноген;

4) кетоны;

5) кровь;

6) эстераза лейкоцитов;

7) нитраты;

8) белок;

9) альбумин;

10) креатинин;

11) трипсиноген;

12) рН;

13) относительная плотность.

Ход исследования

Для исследования в мочу опускают диагностическую полоску, при этом происходит растворение реагентов на каждой подложке, результат химической реакции проявляется в изменении цвета подложки. После определенного интервала времени цвет полоски сравнивается со шкалой. Если результат невозможно определить полуколичественно, его оценивают как «положительный» либо как «отрицательный».

Химическое исследование мочи

Определение белка

Небольшое количество белка в суточной моче обнаруживается и у вполне здоровых лиц, однако такие небольшие концентрации не выявляют в разовых порциях используемыми в настоящее время методами. Приблизительно 70 % белков мочи здорового человека приходится на долю уромукоида – белка, являющегося продуктом почечной ткани; таким образом, доля гломерулярного белка в моче здоровых людей является ничтожно малой и протеинурия в норме составляет 50–150 мг/сутки, причем большинство белков мочи идентичны сывороточным.

Принято различать следующие формы протеинурии в зависимости от места возникновения: преренальную, связанную с усиленным распадом белка тканей, выраженным гемолизом; ренальную, обусловленную патологией почек, которая может быть разделена на клубочковую и канальцевую; постренальную, связанную с патологией мочевыводящих путей и чаще всего обусловленную воспалительной экссудацией. В зависимости от длительности существования выделяют постоянную протеинурию, существующую в течение многих недель и даже лет, и преходящую, появляющуюся периодически, иногда даже при отсутствии патологии почек, например при лихорадке и выраженной интоксикации. Целесообразно различать вариабельность протеинурии: при суточной потере белка до 1 г – умеренную, от 1 до 3 г – среднюю и более 3 г – выраженную. Обнаружение в моче белков с относительно большой молекулярной массой свидетельствует об отсутствии избирательности почечного фильтра и выраженном его поражении. В этих случаях говорят о низкой селективности протеинурии. Поэтому в настоящее время широкое распространение получило определение белковых фракций мочи. Наиболее точны методы электрофореза в крахмальном и полиакриламидном геле. По результатам, полученным этими методами, можно судить о селективности протеинурии.

Большинство качественных и количественных методов определения белка в моче основаны на его коагуляции в объеме мочи или на границе сред (мочи и кислоты); если есть способ измерить интенсивность коагуляции, то проба становится количественной.

Унифицированная проба с сульфосалициловой кислотой

Необходимый реактив

20 %-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход исследования

В 2 пробирки наливают по 3 мл профильтрованной мочи. В опытную пробирку прибавляют 6–8 капель реактива. На темном фоне сравнивают контрольную пробирку с опытной. Помутнение в опытной пробирке указывает на наличие белка, пробу считают положительной.

Если реакция мочи щелочная, то перед исследованием ее подкисляют 2–3 каплями 10 %-ного раствора уксусной кислоты.

Унифицированный метод Брандберга – Робертса – Стольникова

В основу метода положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что на границе азотной кислоты и мочи при наличии белка происходит его коагуляция, в результате чего появляется белое кольцо.

Необходимый реактив

30 %-ный раствор азотной кислоты (относительная плотность 1,2) или реактив Ларионовой. Приготовление реактива Ларионовой: 20–30 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, дают остыть, фильтруют. К 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной азотной кислоты.

Ход исследования

В пробирку наливают 1–2 мл азотной кислоты (или реактива Ларионовой) и осторожно, по стенке пробирки, наслаивают такое же количество профильтрованной мочи. Появление тонкого белого кольца на границе двух жидкостей между 2 и 3-й минутами указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. Если кольцо появляется раньше 2 мин после наслаивания, мочу следует развести водой и провести повторное наслаивание уже разведенной мочи. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, т. е. его ширины, компактности и времени появления. При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком – в 4 раза, при компактном – в 8 раз и т. д. Концентрацию белка при этом вычисляют путем умножения 0,033 на степень разведения и выражают в граммах на 1 л (г/л).

Иногда белое кольцо получается при наличии больших количеств уратов. В отличие от белкового кольца уратное появляется немного выше границы между двумя жидкостями и растворяется при легком нагревании.

Количественное определение белка в моче по помутнению, образующемуся при добавлении сульфосалициловой кислоты

Принцип метода

Интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.

Необходимые реактивы

1. 3 %-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

2. 0,9 %-ный раствор хлорида натрия.

3. Стандартный раствор альбумина – 1 %-ный раствор (1 мл раствора, содержащий 10 мг альбумина): 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9 %-ного раствора хлорида натрия в колбе вместимостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же раствором.

Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5%-ного раствора азида натрия (NaN₃). При хранении в холодильнике реактив годен в течение 2 месяцев.

Специальное оборудование – фотоэлектроколориметр.

Ход исследования

В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, доливают до 5 мл 3%-ным раствором сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 590–650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете длиной оптического пути 5 мм.

Контролем служит пробирка, в которой к 1,25 мл профильтрованной мочи долили до 5 мл 0,9 %-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения, как указано в таблице 34.

Из каждого полученного раствора берут 1,25 мл и обрабатывают так, как опытные пробы.

Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях пробу следует разводить и учитывать разведение при Расчете.

Таблица 34

Приготовление разведений для построения калибровочного графика

Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче контрастных веществ, содержащих органический йод. Поэтому тест нельзя использовать у лиц, принимающих препараты йода; ложноположительный результат может быть также обусловлен приемом сульфаниламидных препаратов, больших доз пенициллина и высокими концентрациями в моче мочевой кислоты.

Биуретовый метод

Принцип метода

Пептидные связи белка с солями меди в щелочной среде образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждают трихлоруксусной кислотой.

Необходимые реактивы

1. 10 %-ный раствор трихлоруксусной кислоты.

2. 20 %-ный раствор меди (CuSO₄ × 5H₂O).

3. 3 %-ный раствор NaOH.

Ход исследования

К 5 мл мочи, взятой из суточного количества, прибавляют 3 мл раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют до постоянного объема осадка. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой, осадок затем растворяют в 5 мл раствора NaОН. К раствору добавляют 0,25 мл CuSO₄, смесь перемешивают и центрифугируют. Надосадочную жидкость фотометрируют при длине волны 540 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм против дистиллированной воды. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочной кривой, при построении которой на оси ординат откладывают концентрацию белка (г/л), а на оси абсцисс – оптическую плотность в единицах экстинкции. По полученной концентрации рассчитывают суточную потерю белка с мочой.

Белок может быть обнаружен с помощью индикаторной бумаги (полосок).

Принцип основан на феномене так называемой протеиновой ошибки некоторых кислотно-щелочных индикаторов. Индикаторная часть бумаги пропитана тетрабромфеноловым синим и цитратным буфером. При увлажнении бумаги буфер растворяется и обеспечивает соответствующий рН для реакции индикатора. При 3,0–3,5 аминогруппы белков реагируют с индикатором и меняют его первоначально желтую окраску на зеленовато-синюю, после чего, сравнивая с цветной шкалой, можно ориентировочно оценить концентрацию белка в исследуемой моче. Основной предпосылкой правильной работы индикаторных полосок является обеспечение pH в диапазоне 3,0–3,5 для протекания реакции. Если бумага находится в контакте с исследуемой мочой дольше экспозиции, указанной в инструкции, то цитратный буфер в ней растворяется, и тогда индикатор реагирует на истинный рН мочи, т. е. дает ложноположительную реакцию. В связи с тем что емкость буфера ограничена, то даже при соблюдении методических указаний в пробах слишком щелочной мочи (pH > 6,5) получаются ложноположительные результаты, а в пробах слишком кислой мочи (рН < 3,0) – ложноотрицательные. Число реагирующих аминогрупп в составе отдельных белков различно, поэтому альбумины реагируют в 2 раза интенсивнее, чем такое же количество γ-глобулинов (белок Бенс-Джонса, парапротеины), и гораздо интенсивнее, чем гликопротеиды. Однако при большом количестве слизи с высоким содержанием гликопротеидов (при воспалении мочевыводящих путей) оседающие на индикаторной полоске хлопья слизи могут давать ложноположительные результаты. Чувствительность отдельных производственных серий индикаторной бумаги, равно как и отдельных видов бумаги, выпускаемой одной и той же фирмой, может быть различной, поэтому к количественной оценке белка этим методом следует относиться осторожно. Определение суточной потери белков с мочой при помощи индикаторной бумаги невозможно. Таким образом, индикаторная бумага уступает химическим пробам, в первую очередь пробе с сульфосалициловой кислотой, хотя и дает возможность быстрого исследования серии образцов.

Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса

Белок Бенс-Джонса может выделяться с мочой при миеломной болезни, макроглобулинемии Вальденстрема.

Исследование целесообразно проводить только при положительной пробе с сульфосалициловой кислотой. Индикаторная бумага для обнаружения белка Бенс-Джонса непригодна.

Принцип метода

Основан на реакции термопреципитации. Методы, с помощью которых оценивают растворение белка Бенс-Джонса при температуре 100 °C или повторное осаждение при последующем охлаждении, ненадежны, так как далеко не все белковые тела Бенс-Джонса обладают соответствующими свойствами. Наиболее достоверно выявление этого парапротеина осаждением его при температуре 40–60 °C, но и в этих условиях осаждение может не произойти в слишком кислой (рН < 3,0–3,5) или слишком щелочной (pH > 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и при низкой концентрации белка Бенс-Джонса.

Необходимый реактив

2 М ацетатный буфер рН 4,9.

Ход исследования

Профильтрованную мочу в количестве 4 мл смешивают с 1 мл буфера и согревают в течение 15 мин на водяной бане при температуре 56 °C. При наличии белков Бенс-Джонса уже в течение 2 мин появляется выраженный осадок, при концентрации белка Бенс-Джонса менее 3 г/л проба может получиться отрицательной. На практике это встречается крайне редко, так как большей частью концентрация белка Бенс-Джонса в моче значительная.

С полной достоверностью белок Бенс-Джонса может быть обнаружен иммуноэлектрофоретическим исследованием при использовании специфических сывороток против тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов.

Определение альбумоз (протеоз)

Альбумозы – это продукты расщепления белков, принцип определения которых основан на том, что они не сворачиваются при кипячении, но дают положительную биуретовую реакцию и высаливаются некоторыми солями, особенно сульфатом аммония и ацетатом цинка в кислой среде.

Нормальная моча альбумоз не содержит. Следы могут быть в нормальной моче в случае примеси семенной жидкости. В патологии альбумозы могут встречаться в моче при лихорадочных состояниях, переливании крови и плазмы, рассасывании экссудатов и транссудатов, распаде опухолей.

Необходимые реактивы

1. Насыщенный раствор хлорида натрия.

2. Концентрированный раствор едкого натра.

3. Слабый раствор сульфата меди (почти бесцветный).

Ход исследования

К моче, подкисленной уксусной кислотой, прибавляют насыщенный раствор хлорида натрия (1/3 объема), кипятят и горячую жидкость фильтруют. Альбумозы проходят в фильтрат, в котором их присутствие определяют биуретовой реакцией. К фильтрату прибавляют 1/2 объема концентрированного раствора едкого натра и несколько капель слабого раствора сульфата меди. При положительной пробе получается красно-фиолетовое окрашивание.

При положительной пробе с сульфосалициловой кислотой мочу нагревают. Если муть исчезает и вновь появляется при охлаждении, это означает, что моча содержит альбумозы или белковое тело Бенс-Джонса.

Определение глюкозы мочи

Нормальную концентрацию глюкозы в моче (до 0,2 г/л) обычными пробами не обнаруживают. Появление глюкозы в моче может быть результатом физиологической гипергликемии (алиментарной, эмоциональной, лекарственной) и патологических изменений в организме.

Физиологическая глюкозурия наблюдается при введении с пищей большого количества углеводов (алиментарная), после эмоционального напряжения (эмоциональная глюкозурия), после приема некоторых лекарств (диуретина, кофеина, кортикостероидов), при отравлениях (морфином, хлороформом, фосфором). Реже наблюдается почечная (ренальная) глюкозурия, обусловленная повышенной проницаемостью почек в отношении глюкозы и появлением ее в моче при нормальном количестве сахара в крови.

Появление глюкозы в моче зависит от концентрации ее в крови, от процесса фильтрации в клубочках (гломерулярных клиренсов) и от реабсорбции глюкозы в канальцах нефрона. Патологические глюкозурии делятся на панкреатогенные и внепанкреатические. Важнейшая из панкреатогенных – диабетическая глюкозурия. Внепанкреатические глюкозурии наблюдаются при раздражении ЦНС, гипертиреозе, синдроме Иценко – Кушинга, патологии печени, почек.

Для правильной оценки глюкозурии (особенно у больных диабетом) необходимо исследовать на сахар мочу, собранную за сутки.

Унифицированный метод определения с помощью индикаторных полосок

Метод основан на специфическом окислении глюкозы с помощью фермента глюкозооксидазы; образовавшаяся при этом перекись водорода разлагается пероксидазой и окисляет краситель. Изменение окраски красителя при окислении свидетельствует о присутствии глюкозы в моче.

Реактивная бумага «Глюкотест» представляет собой полоски бумаги 0,5 × 5 см, имеющие поперечную полосу светло-желтого цвета, пропитанную раствором ферментов и красителя. С помощью бумаги «Глюкотест» можно обнаружить глюкозу в моче и ориентировочно определить ее концентрацию.

Ход исследования

Индикаторную бумагу погружают в исследуемую мочу, так чтобы желтая полоса с реактивами оказалась смоченной, после этого ее немедленно извлекают из мочи и на 2 мин оставляют на пластмассовой пластинке. По истечении 2 мин сразу же сравнивают изменившуюся окраску цветной полосы на бумаге со шкалой, имеющейся в комплекте.

Содержание глюкозы в моче определяют по наиболее совпадающему со шкалой цвету полоски.

Полоски хранят при температуре от +8 до +18 °C, избегая попадания на них прямых солнечных лучей; не рекомендуется дотрагиваться рукой до цветной шкалы полоски.

Исследуют свежесобранную мочу; при содержании в моче глюкозы более 20 г/л интенсивность окраски цветной полосы становится предельной (соответствует 2 % по шкале) и далее не меняется.

Унифицированные методы обнаружения глюкозы в моче

Проба Гайнеса

Можно использовать готовый набор реактивов.

Метод основан на способности глюкозы восстанавливать в щелочной среде при нагревании гидрат окиси меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись меди (красного цвета).

Для того чтобы из гидрата окиси меди при нагревании не образовался черный осадок окиси меди, к реактиву добавляют глицерин, гидроксильные группы которого связывают гидрат окиси меди.

Необходимые реактивы

1. Реактив Гайнеса: 13,3 г кристаллического сульфата меди (СuSO₄ × 5Н₂О) растворяют в 400 мл дистиллированной воды.

2. 50 г едкого натра растворяют в 400 мл дистиллированной воды.

3. 15 г глицерина растворяют в 200 мл дистиллированной воды. Далее первый и второй растворы смешивают и тотчас же приливают третий раствор. Реактив стоек.

Ход исследования

К 6–8 мл мочи прибавляют 20 капель реактива до появления голубоватой окраски, смешивают и нагревают верхнюю часть пробирки до начала кипения. Нижняя часть пробирки – контроль. При наличии глюкозы в моче появляется желтая окраска в верхней части пробирки.

При бактериурии глюкоза мочи быстро разлагается.

Проба Бенедикта

Реакция основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в щелочной среде в гидрат закиси меди (желтый цвет) или закись меди (красный цвет).

Необходимые реактивы

1. В однолитровую мерную колбу наливают 700 мл воды, добавляют 173 г цитрата натрия, 100 г безводного (или 200 г кристаллического) карбоната натрия. Нагревают до растворения.

2. Отдельно растворяют 17,3 г сульфата меди в 100 мл воды.

Смешивают оба раствора, непрерывно взбалтывая, после охлаждения доливают водой до 1 л.

Ход исследования

В пробирку наливают 5 мл реактива и прибавляют 8–10 капель мочи. Пробу нагревают в течение 2 мин на пламени или 5 мин в кипящей водяной бане. Дают пробирке остыть в течение 5–7 мин. При наличии сахара появляется зеленая, желтая или красная окраска жидкости с осадком. При зеленой окраске без наличия осадка проба считается отрицательной.

Проба Бенедикта является самой надежной, так как при большом разведении мочи (8–10 капель мочи на 5 мл реактива) восстанавливающее действие других редуцирующих веществ мочи выражено слабо.

Проба Нилендера

Проба основана на восстановлении глюкозой нитрата висмута в металлический.

Необходимый реактив

2 г нитрата висмута растирают в ступке с 4 г сегнетовой соли, растворяют в 100 мл 10 %-ного едкого натра и фильтруют. Реактив бесцветный. Хранят в бутылке из темного стекла.

Ход исследования

К моче прибавляют реактив в соотношении 2: 1 и кипятят в течение 3 мин. В присутствии сахара появляется окраска от коричневой до черной, при стоянии образуется темный осадок. Эта проба чаще, чем другие, оказывается положительной при отсутствии сахара в моче. Положительный результат получается в присутствии других редуцирующих веществ, находящихся в моче (такие как белок, лекарственные вещества: антипирин, салициловая кислота, антибиотики – биомицин, тетрациклин).

Унифицированный поляриметрический метод определения содержания глюкозы

Метод основан на использовании свойства раствора глюкозы вращать плоскость поляризованного луча вправо. Угол вращения пропорционален концентрации глюкозы в растворе.

Необходимый реактив

30 %-ный раствор ацетата свинца.

Специальное оборудование – поляриметр.

Ход исследования

Исследуемая моча должна быть кислой реакции, прозрачной и не содержать белка. Белок удаляют кипячением с последующим фильтрованием. Необходимо также обесцветить мочу, так как некоторые пигменты могут быть оптически активны. Лучше всего обесцвечивание достигается обработкой ацетатом свинца, для этого к 10 мл мочи приливают 1 мл 30 %-ного ацетата свинца, подкисленного несколькими каплями уксусной кислоты (в щелочной среде свинец осаждает глюкозу), перемешивают, фильтруют. Исследовать можно только прозрачный фильтр. Затем трубку поляриметра наполняют прозрачным фильтратом, избегая попадания пузырьков воздуха, накрывают шлифованным стеклом, помещают в аппарат и через 2–3 мин проводят определение. Это время необходимо для затихания колебаний частиц жидкости. Определение ведут строго по инструкции, прилагаемой к данному аппарату.