Читать книгу "Анализы. Актуальные сведения по лабораторным исследованиям под рукой"

Ход окраски

На фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги и наливают раствор генцианвиолета. Окрашивают в течение 1,5–2 мин. Бумажку сбрасывают и заливают препарат раствором Люголя на 2 мин. Раствор Люголя сливают и прополаскивают препарат в спирте до сероватого цвета. Промывают водой и окрашивают 10 %-ным раствором карболового фуксина в течение 10–15 с. Снова промывают водой, высушивают препарат на воздухе.

По своей морфологии палочка Деферлейна грубая, толстая, грамположительная. Различают 4 степени чистоты влагалища (см. выше).

Основным условием для существования влагалищной палочки является высокая степень кислотности (рН 4,0–4,7). Во влагалищном содержимом и в эпителии содержится в большом количестве гликоген.

Существует тесная связь между рН влагалища и количеством гликогена. Кокковая флора соответствует низкому содержанию гликогена и низкой степени кислотности влагалищного содержимого. Степень чистоты может служить относительным тестом функционального состояния влагалища, особенно при аномалиях менструального цикла.

Исследование на трихомонады

Приготовление нативного препарата

Каплю отделяемого из влагалища, взятого пипеткой или петлей, наносят на предметное стекло, покрывают покровным и тотчас микроскопируют. В нативном препарате обнаруживают подвижные формы, которые распознаются по характерному движению ундулирующей мембраны. После потери движения микроорганизм в нативном препарате распознать нельзя.

Окрашенные препараты

Каплю отделяемого распределяют на стекле тонким слоем. Мазки высушивают. Для окрашивания предложено много различных методов: метиленовый синий, окраска по Граму, метод Романовского и др.

Из перечисленных методов наиболее удобным является метод Романовского. При этой окраске трихомонады распознаются легко (ядро фиолетовое, протоплазма вакуолизированная голубая, содержащая бактерии). При этом хорошо виден окружающий их клеточный фон (нейтрофилы, эозинофилы и эпителиальные клетки). В мазках, окрашенных метиленовым синим, трихомонады легко спутать с измененными клетками.

Бактериоскопическое исследование

Отделяемое влагалища исследуют в основном для обнаружения гонококков. В некоторых случаях можно обнаружить и другие патогенные микроорганизмы:

1) палочка дифтерии при дифтерии половых органов. Истинную природу обнаруженной палочки устанавливают только путем бактериологического исследования и проверкой на вирулентность. Дифтерия половых органов – очень редкое заболевание;

2) Bacillus crassus – возбудитель острой язвы вульвы Чапина – Люпшютца. В этом случае при бактериологическом исследовании мазков гнойного отделяемого, окрашенных по Граму, обнаруживают грамположительные палочки длиной от 7–8 до 40 мк, с обрезанными концами, располагающиеся иногда короткими цепочками, а иногда лежащие внутриклеточно. Поражение вульвы и влагалища может быть также грибковой природы (например, грибок молочницы).

Исследование околоплодных вод

Изливающиеся воды при разрыве плодного пузыря принимают иногда за подтекающую мочу. Правильность трактовки в таких случаях устанавливается микроскопическим исследованием.

Необходимые реактивы

1. Раствор Судана 3.

2. 1 %-ный водный раствор эозина.

Ход исследования

Собранную жидкость помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, из осадка готовят препараты и микроскопируют.

Элементы околоплодных вод: «чешуйки» плода, пушковые волосы (lanugo), капли жира.

Определение «чешуек»

Каплю осадка наносят на стекло и покрывают покровным стеклом. Тонким концом пипетки с баллоном впускают под покровное стекло каплю 1 %-ного водного раствора эозина, который равномерно прокрашивает препарат. Избыток краски отсасывают фильтровальной бумагой с противоположного края покровного стекла. Затем точно таким же путем препарат промывают водой. При микроскопии на розовом фоне обнаруживают неокрашенные, хорошо контурированные безъядерные клетки кожи плода («чешуйки»), которые часто лежат скоплениями. «Чешуйки» не воспринимают окраску эозином, так как они покрыты первородной смазкой (жиром). Клетки влагалищного эпителия красятся в ярко-розовый цвет; ядра хорошо выражены.

Определение жира

К капле осадка прибавляют каплю раствора Судана 3, покрывают покровным стеклом. При микроскопии видны капли жира, окрашенные в оранжевый цвет. При определении жира в околоплодных водах требуется тщательно обработанная посуда (обезжиренная).

Обнаружение пушковых волос (lanugo) производят в нативном препарате. Определение «чешуек» дает 99 % положительных находок при исследовании раннего отхождения околоплодных вод, обнаружение капель жира – в 100 %, lanugo выявляются редко.

Исследование на гонококки

Взятие материала

У женщин отделяемое берут одновременно из уретры, влагалища и шейки матки. Выделения из бартолиниевых желез исследуют только по клиническим показаниям. Иногда берут выделения из прямой кишки: спустя 3–4 ч после опорожнения кишечника делают смыв физиологическим раствором, который центрифугируют, после чего исследуют осадок.

У мужчин берут отделяемое из уретры (утром до первого мочеиспускания), секрет простаты, полученный после массажа железы, или мочу, выделенную после массажа. Кроме того, исследуют мочу, собранную утром после длительного воздержания от мочеиспускания. У девочек отделяемое берут из уретры, влагалища и прямой кишки (промывные воды).

Из полученного материала готовят тонкие мазки. Если материалом для исследования служит моча, то препараты готовят из осадка после центрифугирования.

Окраска препаратов

Высушенные и фиксированные над пламенем препараты (делают, как правило, не меньше двух препаратов) окрашивают по Граму и метиленовым синим.

Окраска метиленовым синим

Фиксированные препараты заливают 0,5–1 %-ным водным раствором метиленового синего на 1 мин; промывают водой и высушивают.

Окраска по Граму

Окраска по Граму требует особой тщательности, так как при недостаточном обесцвечивании гонококки могут сохранить окраску Грама, при слишком длительном обесцвечивании окраску могут терять другие грамположительные кокки (стафилококки, стрептококки). Это может привести к ошибочным результатам. Для цитологического исследования препараты окрашивают по Романовскому (при этом нередко обнаруживают эозинофилы, особенно в период выздоровления).

При исследовании под микроскопом гонококки имеют форму кокков, парно расположенных. Поверхности, обращенные друг к другу, несколько уплощены. Гонококки часто располагаются кучками, в острых случаях заболевания находятся главным образом в лейкоцитах. При окраске по Граму обесцвечиваются и окрашиваются в розовый цвет (грамотрицательно).

Бактериоскопический метод, хотя и является основным для выявления гонококков, имеет ряд недостатков: сравнительно редкое обнаружение гонококков и трудность их дифференцирования от другой кокковой флоры, особенно в случаях, когда проводилось лечение. Однократный отрицательный результат не доказателен, поэтому требуются повторные исследования.

При исследовании мазков от больных гонореей в основном наблюдается бактериоскопическая картина 3 видов.

1. Лейкоциты покрывают все поле зрения; часто гонококки расположены внутриклеточно. Имеются также гонококки, лежащие свободно. Другие микроорганизмы при этом не обнаруживаются.

2. Клеточная картина та же самая, но гонококков нет. Посторонняя флора отсутствует. Такая картина часто наблюдается при хронической гонорее.

3. Небольшое количество дегенерированных лейкоцитов и обильная посторонняя флора, появление которой говорит об улучшении течения процесса.

Исследование отделяемого молочных желез

Исследование грудного молока

Отличие женского молока от коровьего (проба Умикова)

Принцип метода

При нагревании женского молока до 60 °C аммиаком получается фиолетовое окрашивание.

Необходимый реактив

10 %-ный раствор аммиака.

Ход исследования

Молоко из молочной железы получают путем сцеживания руками или аппаратом в любое время между кормлениями ребенка, однако лучше сцедить небольшое количество молока до кормления и после него, а затем обе порции смешать. Лучшее время для взятия молока – 9–10 ч.

В пробирку наливают 2 мл молока, добавляют 2 мл раствора аммиака. Затем пробирку встряхивают. Через несколько минут исследуемое молоко окрашивается в фиолетовый цвет.

Окраска исследуемого молока в фиолетовый цвет указывает на принадлежность его женщине. Реакция особенно хорошо выражена в позднем лактационном периоде.

Определение удельного веса

Исследуемое молоко наливают в стеклянный цилиндр и погружают в него ареометр. Цилиндр в строго вертикальном положении держат против света. Мениск молока указывает на шкале ареометра цифру удельного веса. Он колеблется между 1,026–1,036 при температуре 15 °C. Если температура воздуха выше или ниже, на каждый градус добавляют (если она выше 15 °C) или убавляют (если она ниже 15 °C) к указанию ареометра 0,001. Молоко для исследования удельного веса лучше всего получать в течение второго часа после кормления ребенка.

Количественное определение жиров молока (метод Бабкова)

Принцип метода

Концентрированная серная кислота приводит к осаждению жира.

Необходимые реактивы

1. Серная кислота удельного веса 1,83–1,84.

2. Кислотно-алкогольная смесь (равные части амилового спирта и концентрированной соляной кислоты).

Оборудование: бутирометр.

Ход исследования

Исследуемое молоко узкой пипеткой вливают в бутирометр до метки «5». Прибавляют серную кислоту до горлышка бутирометра. Затем вращательными движениями содержимое бутирометра доводят до гомогенной смеси. После этого горлышко бутирометра наполняют кислотно-алкогольной смесью и центрифугируют в течение 1–2 мин. Отделившийся жир отсчитывают по шкале бутирометра (в процентах). Если уровень жира не доходит до метки «0», прибавляют к смеси горячую воду и вновь центрифугируют. Если процент жира выше 5, содержимое бутирометра разводят равным объемом воды и вновь центрифугируют, а полученный при этом процент жира умножают на 2.

Среднее содержание жира в женском молоке составляет 3,7 %.

Микроскопическое исследование молока

На очищенное и обезжиренное предметное стекло наносят пипеткой одну каплю исследуемого молока и покрывают покровным стеклом. Препарат рассматривают в микроскопе при опущенном конденсоре при среднем увеличении. Видны капельки жира, большее или меньшее число лейкоцитов, бактерии.

У здоровой женщины в молоке видны множество жировых капель, единичные лейкоциты, иногда бактерии. При воспалительных процессах (мастит) в препарате молока имеется большое число лейкоцитов (нейтрофилы) и микроорганизмов, главным образом стафилококков, в меньшей степени стрептококков; изредка встречаются и другие микробные ассоциации.

Исследование выделений из соска вне лактационного периода

Выделения из соска могут быть при заболеваниях молочной железы различной этиологии (воспалительные процессы, туберкулез, актиномикоз, мастопатии, новообразования и др.). Из полученного материала готовят нативные препараты (каплю отделяемого помещают на предметное стекло и покрывают покровным) и тонкие мазки для цитологического, а при необходимости и бактериоскопического исследования.

Цитологическое исследование для решения вопроса о новообразовании требует большого опыта и навыка исследователя.

При бактериоскопическом исследовании мазков можно обнаружить кокковую и палочковую флору. При подозрении на туберкулез препараты красят по Цилю – Нильсену.

Глава 10
Исследование мокроты

Сбор и обезвреживание материала

Мокротой называется патологический секрет, выделяемый с кашлем из легких и дыхательных путей. Больным при организации сбора мокроты необходимо разъяснять, что для исследования нужно собирать мокроту, выделенную при откашливании, а не слюну и слизь из носоглотки.

Для сбора мокроты используют чистую, сухую, широкогорлую склянку. Существуют индивидуальные плевательницы из темного стекла, с завинчивающимися крышками и градуировкой на боковой поверхности.

Сбор мокроты для общего клинического анализа осуществляется утром до приема пищи, примесь которой мешает исследованию. Собирают мокроту после тщательного полоскания рта и горла, чистки зубов.

Перед забором полость рта можно тщательно прополоскать раствором пищевой соды, фурацилина (1: 5000), 0,01 %-ным раствором калия перманганата. После этого больной, откашливаясь, собирает в посуду 3–5 мл мокроты. Анализ мокроты производят в день ее выделения.

Мокроту необходимо направить в лабораторию в течение 2 ч с момента забора, так как длительное стояние ведет к размножению флоры и аутолизу клеточных элементов. При необходимости мокроту сохраняют в холодильнике.

Сбор мокроты для выявления микобактерий туберкулеза осуществляется в течение суток, так как в лабораторию необходимо представить достаточное ее количество – не менее 12–15 мл.

Для сбора мокроты на чувствительность к антибиотикам используют стерильные чашки Петри.

В ряде случаев больной не может собрать мокроту на исследование в связи с ее малым количеством или трудностью отделения. Тогда накануне сбора мокроты больному дают отхаркивающие или муколитические средства (термопсис, йодистый калий).

Мокрота чаще всего инфицирована, поэтому по окончании работы исследуемый материал, посуду, в которой он находился, предметные стекла следует обеззараживать. Обеззараживание производят физическими и химическими методами. К физическим методам относится кипячение в воде с добавлением соды в течение 1 ч, а также автоклавирование при температуре 120 °C в течение 30 мин.

Препаровальные иглы после употребления немедленно прокаливают на огне.

Для обеззараживания химическим методом используют активированные аммонийными соединениями растворы хлорамина и хлорной извести (50 г хлорамина и 50 г сульфата или хлорида аммония на 1 л дистиллированной воды). Заливают инфицированный материал двойным количеством дезинфицирующего раствора и оставляют на 4 ч. Можно использовать ДТСГК (двутретьосновную соль гипохлорида кальция), обладающую большой бактерицидной активностью. После обеззараживания посуду моют обычными средствами.

Мокроту с микобактериями туберкулеза дезинфицируют кипячением вместе с плевательницами или раздельно в 2 %-ном растворе гидрокарбоната натрия в течение 15–20 мин с момента закипания.

Для химической дезинфекции мокроту обрабатывают 5 %-ным раствором хлорамина в течение 6 ч (так как лекарственно-устойчивые микобактерии туберкулеза могут обладать повышенной устойчивостью к дезинфицирующим препаратам, целесообразно увеличить экспозицию в этих случаях до 12 ч), 2,5 %-ным активированным хлорамином в течение 2 ч.

Оба эти препарата применяют в соотношении: 1 часть мокроты – 2 части дезинфицирующего раствора. Для дезинфекции мокроты используют также хлорную известь в соотношении: 100 мл мокроты – 20 г сухой хлорной извести; после перемешивания дезинфекция продолжается 1 ч.

Физические свойства мокроты

Консистенция тесно связана с характером мокроты и может быть вязкой, густой, жидкой.

Вязкость зависит от содержания слизи и от количества форменных элементов (лейкоцитов, эпителия). Количественное измерение вязкости проводится с помощью специального капиллярного вискозиметра. Вязкая мокрота обнаруживается при муковисцидозе, бронхиальной астме. При хронических неспецифических заболеваниях легких выявлена зависимость между величиной вязкости мокроты и содержанием в ней мукополисахаридов, ДНК, нейтрофилов и других продуктов воспалительной реакции. Так, вязкость слизисто-гнойной и гнойной мокроты существенно выше, чем слизистой. Величина вязкости отражает степень обсемененности мокроты патогенными бактериями. Установлено, что повышение в мокроте уровня патогенных микробов, протеолитические ферменты которых активно расщепляют мукополисахариды, ведет к снижению вязкости. Величина вязкости расценивается как один из показателей активности легочного воспалительного процесса: при усилении бактериального воспаления наблюдается разжижение мокроты, в процессе успешной антибактериальной терапии вязкость мокроты повышается, а ее суточный объем уменьшается.

Количество мокроты может меняться в широких пределах от 10 до 100 мл. Суточное количество, как и величина отдельных порций, зависит, с одной стороны, от характера заболевания, с другой – от способности больного к отхаркиванию. Скудное количество мокроты выделяется при воспалении дыхательных путей (ларингите, трахеите, остром бронхите в начальной стадии, бронхиальной астме, бронхопневмонии). Обильное количество мокроты (от 0,5 до 2 л) выделяется обычно из полостей легочной ткани, бронхов (бронхоэктатическая болезнь, абсцесс легкого, прорыв эмпиемы) при кровенаполнении легких и пропотевании в бронхи большого количества плазмы крови (отек легких).

При отставании значительного количества гнойной мокроты можно обнаружить 2 слоя (гной и плазма) или 3 (гной, плазма и комочки слизи на поверхности). Двухслойная мокрота характерна для абсцесса легкого, трехслойная – для бронхоэктатической болезни, туберкулеза легких (при наличии каверн).

Цвет и прозрачность зависят от характера мокроты, так как преобладание одного из субстратов (слизи, гноя) придает мокроте соответствующий оттенок, а также от состава вдыхаемых частиц. Чаще мокрота бесцветная, изменение цвета мокроты возникает при различных заболеваниях. Слизистая мокрота стекловидная, прозрачная, слизисто-гнойная – стекловидная с желтым оттенком, гнойно-слизистая – желто-зеленоватая, гнойная – желто-зеленая, слизисто-кровянистая – стекловидная с розоватым или ржавым оттенком, слизисто-гнойно-кровянистая – стекловидная с желтыми комочками, прожилками красного цвета или ржавым оттенком; отделяемое при легочном кровотечении жидкое, прозрачно-желтое, с опалесценцией, пенистое и клейкое из-за присутствия белков плазмы. Отделяемое при легочном кровотечении жидкое, красного цвета, пенистое (за счет содержания пузырьков воздуха). При злокачественных новообразованиях (распаде опухоли) изредка может наблюдаться мокрота в виде «малинового желе».

Мокрота с инородными примесями имеет цвет этих примесей: белая у мукомолов, черная у шахтеров, синяя при вдыхании метиленового синего, ультрамариновой краски и т. д.

Некоторые лекарственные средства могут менять окраску мокроты, например, рифампицин окрашивает мокроту в красный цвет.

Запах. Обычно мокрота не имеет запаха. Он появляется при длительном стоянии, а также при задержке мокроты в бронхах или полостях в легких (обусловливается деятельностью анаэробов, вызывающих гнилостный распад белков до индола, скатола и сероводорода). Неприятный запах мокрота может иметь при хронических бронхитах с плохим дренированием бронхов, резкий неприятный запах – при бронхоэктатической болезни, абсцессе легкого, иногда туберкулезе, злокачественных новообразованиях с некрозом, зловонный (гнилостный) запах отмечается при гангрене легкого. Для вскрывшейся эхинококковой кисты характерен своеобразный фруктовый запах.

Реакция. Обычно мокрота имеет нейтральную или щелочную реакцию. Кислую реакцию приобретает разложившаяся мокрота.

Макроскопическое исследование мокроты

От выбора материала, из которого готовят препараты, во многом зависит успех исследования. Мокроту выливают на чашку Петри и, раздвигая препаровальными иглами, рассматривают на белом и черном фоне. При макроскопическом изучении обращают внимание на характер мокроты, ее количество, цвет, запах, консистенцию, слизистость, наличие различных включений.

Характер мокроты определяется ее составом.

Слизистая состоит из слизи – продукта слизистых желез дыхательных путей. Выделяется при острых бронхитах, катарах верхних дыхательных путей, разрешении приступа бронхиальной астмы.

Слизисто-гнойная представляет смесь слизи и гноя, причем слизь преобладает, а гной включен в виде комочков или прожилок. Наблюдается при хронических бронхитах, бронхопневмониях.

Гнойно-слизистая содержит гной и слизь с преобладанием гноя; слизь имеет вид тяжей. Появляется при хронических бронхитах, бронхоэктазах, абсцедирующей пневмонии и т. д.

Гнойная не имеет примеси слизи и появляется в случае открытого в бронх абсцесса легкого, при прорыве экземы плевры в полость бронха.

Слизисто-кровянистая состоит в основном из слизи с прожилками крови или кровяного пигмента. Отмечается при катарах верхних дыхательных путей, пневмониях, бронхогенном раке.

Слизисто-гнойно-кровянистая содержит слизь, кровь, гной, чаще равномерно перемешанные между собой. Появляется при бронхоэктазах, туберкулезе, актиномикозе легких, бронхогенном раке.

Кровавое отделяемое (кровохарканье) наблюдается при легочных кровотечениях (туберкулезе, ранении легкого, опухоли легкого и бронхов, актиномикозе).

Серозное отделяемое характерно для отека легких (левожелудочковая недостаточность, митральный стеноз, отравление боевыми отравляющими веществами), представляет собой пропотевшую в полость бронхов плазму крови.

Спирали Куршмана имеют вид беловатых закрученных нитей, резко отграниченных от остальных частей мокроты, имеют диагностическое значение при бронхиальной астме.

Фибринозные свертки представляют собой беловато-красноватые клубочки, которые при отмывании обнаруживают ветвистое строение. Длина свертков от нескольких миллиметров до 10–12 см. Определяются при фибринозном бронхите.

Пробки Дитриха (гнойные пробки) – это маленькие творожистые комочки белого или желтовато-серого цвета со зловонным запахом, состоящие из детрита, бактерий, кристаллов жирных кислот; встречаются при бронхоэктазах, гангрене легкого.

Рисовидные тельца (линзы Коха) – желтовато-зеленоватые плотные образования творожистой консистенции величиной с булавочную головку, состоящие из детрита, туберкулезных палочек и эластических волокон; обнаруживаются при кавернозном туберкулезе легких.

Дифтерические пленки из зева и носоглотки – сероватые обрывки, местами окрашенные кровью, состоящие из фибрина и некротизированных клеток.

Обрывки легочной ткани представляют собой некротизированные кусочки легкого различной величины, темно-серого цвета, содержащие эластические волокна и зернистый черный пигмент, иногда пронизанные соединительной тканью, кровеносными сосудами, лейкоцитами и эритроцитами; встречаются при абсцессе и гангрене легкого.

Друзы актиномицета имеют вид мелких желтоватых или сероватых зерен, покрыты гнойной массой, содержатся в скудном количестве.

Пузыри эхинококка встречаются в мокроте редко. Чаще при разрыве эхинококковой кисты обнаруживают обрывки хитиновой оболочки пузыря в виде серовато-белых пленчатых образований. Эти элементы употребляют для приготовления нативных и окрашенных препаратов.