Автор книги: Коллектив авторов
Жанр: Медицина, Наука и Образование
Возрастные ограничения: 12+
сообщить о неприемлемом содержимом
Получение смыва мочевого пузыря
Смыв производится следующим раствором: спирта 96 %-ного (15 мл), 1 %-ного раствора новокаина (81 мл). Раствор готовят стерильно. Для процедуры необходимо 50–100 мл раствора.
Мочевой пузырь освобождают, промывают и на 10 мин вводят указанный выше раствор (для усиления эксфолиации клеток). Затем пузырь опорожняют (у женщин с помощью катетера). Полученный материал центрифугируют. Из осадка готовят препараты, которые сначала просматривают в нативном виде. При наличии подозрительных клеток фиксируют и красят по Романовскому. В нативном препарате не всегда можно уловить все признаки злокачественного перерождения клеток. Поэтому требуется обязательное сочетание исследования нативного и окрашенного препарата.
Признаки злокачественного перерождения клеток:
1) полиморфизм величины, а часто и формы клеток; отдельные клетки могут быть гигантских размеров;
2) нарушения ядерно-протоплазменного соотношения в сторону увеличения ядра, иногда до гигантских размеров;
3) неправильная, часто уродливая, форма ядра;
4) наличие в ядрах нуклеол, часто больших, множественных, неправильной формы;
5) часто встречающиеся клеточные митозы;
6) способность клеток к фагоцитозу;
7) химическая анаплазия, гиперхромия ядра и резкая базофилия цитоплазмы отдельных клеток.
Небольшое количество одиночно расположенных клеток с перечисленными признаками не считается достоверным. Для подтверждения диагноза необходимо искать групповое их расположение и расположение в виде комплексов. Для распознавания клеток с признаками злокачественного перерождения требуются просмотр большого количества препаратов и опыт исследователя.
Злокачественные опухоли могут подвергаться распаду и некрозу. Присутствие в препаратах клеток с дегенеративными явлениями (резкой вакуолизацией, жировой дистрофией, детритом) и продуктов тканевого распада (гематоидина, холестерина, некротизированных тканевых фрагментов) является подозрительным на злокачественную опухоль. Такой материал требует особо тщательного исследования. Клетки злокачественных опухолей находят в моче при опухолях мочевого пузыря, предстательной железы и др. При опухолях половых органов и женской половой сферы опухолевые элементы также могут попадать в мочу. При опухолях почек злокачественные клетки в моче находят чрезвычайно редко. Подозрительным признаком на злокачественный процесс почки является наличие в мочевом осадке кристаллов гематоидина, жироперерожденных клеток, мелких некротизированных фрагментов и эритроцитов.
Определение диастазы мочи
В нормальной моче диастаза содержится в небольшом количестве – 16–64 единицы. Количество выше 128 единиц указывает на патологию (панкреатит, некроз поджелудочной железы, заболевание желчных путей). При продолжительной закупорке протока поджелудочной железы количество диастазы в моче может снизиться. При почечной недостаточности диастаза в моче отсутствует.
Метод определения диастазы мочи основан на переваривании крахмала диастазой.
Необходимые реактивы
1. Физиологический раствор (0,85 %-ный раствор хлорида натрия).
2. Буферный раствор фосфата рН 7,2.
3. Толуол.
4. Раствор крахмала: 60–70 мл физиологического раствора нагревают до кипения. В отдельную пробирку наливают 2–3 мл физиологического раствора и всыпают туда 1 г растворимого крахмала, тщательно размешивают стеклянной палочкой, вливают его тонкой струей в кипящий физиологический раствор и смешивают. Пробирку несколько раз ополаскивают небольшими порциями физиологического раствора, выливая их в тот же стакан, дают вскипеть. После охлаждения переносят в мерную колбу на 100 мл и доливают физиологический раствор до метки. Этот 1 %-ный раствор крахмала разводят в 10 раз физиологическим раствором. К 90 мл полученного 1 %– ного раствора крахмала приливают 10 мл буферного раствора фосфатов с рН 7,2 и 10 мл толуола (при хранении в прохладном и темном месте раствор стоек в течение 3 месяцев). При отсутствии фосфатного буфера 1 %-ный раствор крахмала годен в течение нескольких дней.
Для исследования необходим также приблизительно 0,02 н раствор йода: 20 мл 0,1 н раствора отмеривают в мерную колбу емкостью в 100 мл и доводят до метки водой. Можно пользоваться раствором Люголя.
Ход исследования
В штатив ставят 15 пробирок, разливают в каждую пробирку, кроме первой, по 1 мл физиологического раствора. В первую и вторую пробирку наливают по 1 мл испытуемой мочи, смешивают. Из второй пробирки переносят 1 мл смеси в третью, смешивают и 1 мл смеси переносят в четвертую и т. д. до пятнадцатой, из которой 1 мл смеси выливают. Объем жидкости в каждой пробирке 1 мл. Разведения смесей, начиная со второй пробирки: 2, 4, 8 и т. д.
В каждую пробирку наливают по 2 мл 1%-ного раствора крахмала и ставят весь штатив на 15 мин на водяную баню при 45 °C, после чего штатив переносят в холодную воду (для прекращения действия фермента).
После этого в каждую пробирку вносят по одной капле 0,02 н раствора йода и наблюдают за стойкостью окрашивания в пробирках (синего, красно-синего, красного или желтого). Если окраска исчезает быстро, то прибавляют по каплям йод, пока она не будет исчезать в течение нескольких минут.
Расчет
В той пробирке, где жидкость окрашена в синий цвет, диастатического действия нет. Оно закончилось в предыдущей пробирке, которую и берут для Расчета. Например: в шестой пробирке имеется непереваренный крахмал. Вычисляют, какое количество мочи содержится в пятой пробирке (разведение 1: 16), где нет синего оттенка. 1/16 мл мочи переваривает 2 мл крахмала, 1 мл мочи – 32 мл крахмала.
Результат
d (диастаза) 45° / 15 ‘ = 32 единицы.
Исследование мочевых камней
Мочевые камни могут быть мочекислыми, оксалатовыми, фосфатовыми, цистиновыми.
Необходимые реактивы
1. Соляная кислота.
2. Азотная кислота.
3. Аммиак.
4. Ледяная уксусная кислота.
5. Молибденовокислый аммоний.
6. 30 %-ный раствор едкого натра.
Ход исследования
Камень измельчают в ступке. Частицы камня сжигают на листочке платины. Если остаются преимущественно несгорающие частицы – это фосфаты, карбонаты, щавелевокислая известь.
Если частицы сгорают – это мочевая кислота, цистин, ксантин, фибрин. Присутствие оксалатов дает своеобразное красное тление, при этом образуется окись кальция, которая изменяет цвет фенолфталеиновой бумаги, смоченной в воде, на красный. Цистин горит синеватым пламенем и дает запах серной кислоты. Другую часть порошка растворяют в крепкой соляной кислоте. Та часть, которая растворяется, – раствор, нерастворенная часть – осадок.
Осадок
Нерастворенными остаются органические субстанции и мочевая кислота. Осадок отделяют центрифугированием. Часть его осторожно выпаривают в фарфоровом тигле с каплей азотной кислоты до высыхания: мочевая кислота дает покраснение, добавление аммиака – пурпурно-красное окрашивание, а добавление едкого натра – сине-фиолетовое (мурексидная проба).
Другую частицу сжигают на листочке платины. При сгорании мочекислых соединений появляется запах синильной кислоты.
Раствор (солянокислый) может содержать щавелевокислую и сернокислую известь, фосфаты, цистин, ксантин.
Прибавляют немного аммиака, выпадает осадок (II) из фосфатов и оксалатов.
Осадок II отделяют центрифугированием и прибавляют к нему ледяную уксусную кислоту и воду. Растворяются фосфаты (раствор II), нерастворимыми остаются оксалаты, а также цистин. Центрифугируют, получают осадок III.
Осадок III: оксалаты растворяют в соляной кислоте. При нейтрализации аммиаком они вновь выпадают. При сжигании частицы осадка происходит тление и образуется щелочно реагирующий порошок.
Раствор II. Уксуснокислый раствор делят на 2 пробирки. В одну прибавляют немного оксалата аммония. Если в растворе находилась фосфорнокислая известь, то она выпадает в виде кристаллов щавелевокислого кальция. Их отфильтровывают и к фильтрату (раствор II) прибавляют 1/3 объема аммиака. Появление кристаллического осадка указывает на присутствие магнезии и фосфорнокислых солей.
Во вторую пробирку прибавляют несколько капель азотной кислоты и молибденовокислого аммония, слегка подогревают. Пожелтение и выпадение небольшого осадка доказывает присутствие фосфорной кислоты. Это говорит о наличии фосфата кальция.
Проба на карбонаты
На предметное стекло помещают каплю соляной кислоты и немного измельченного камня. Под микроскопом наблюдают за выделением пузырьков углекислоты.
Проба на аммиак
Часть измельченного камня переносят в пробирку и взвешивают в воде, прибавляют немного 30 %-ного раствора едкого натра, слегка подогревают, держа над пробиркой красную лакмусовую бумажку. Пары аммиака вызывают посинение бумаги. Если обе последние пробы дают отрицательный результат, то камень не содержит магнезиальных соединений.
Тесты для выявления наследственных и приобретенных нарушений обмена веществ
Исследуют утреннюю порцию мочи.
Обнаружение белка
Проба с бромфеноловым синим
В норме белок в моче не обнаруживают.
Принцип метода
Изменение окраски индикатора в присутствии белка.
Необходимые реактивы
1. 5,5-диэтилбарбитуровой кислоты натриевая соль (мединал).
2. Натрия ацетат (NaOOCCH3 × 3Н2О).
3. НСl 0,1 моль/л.
4. Барбитал-ацетатный буфер рН 8,6: 8,6 г мединала и 6,48 г ацетата натрия растворяют в 100 мл воды, добавляют 60 мл НСl и доводят до 1 л водой.
5. Бромфеноловый синий водорастворимый.
6. Цинка сульфат (ZnSO4 × 7Н2О).
7. Раствор индикатора: 0,5 г бромфенолового синего и 50 г сульфата цинка растворяют в 1 л воды.
8. Уксусная кислота: к 1 мл концентрированной уксусной кислоты добавляют 99 мл воды.
9. Раствор альбумина: 10 г альбумина растворяют в 1 л изотонического раствора хлорида натрия (9 г/л), рабочие растворы альбумина готовят путем разведения основного раствора в 2; 4; 8 и 16 раз водой.
10. Натр едкий 0,02 моль/л.
Ход исследования
На фильтровальную бумагу, предварительно пропитанную барбитал-ацетатным буфером и высушенную, наносят 0,02 мл исследуемой мочи.
После высыхания бумагу с нанесенной пробой окрашивают индикатором, а избыток краски отмывают раствором уксусной кислоты в течение 5–7 мин.
Результат оценивают визуально, сравнивая окраску в опыте с окраской, которую дают стандартные растворы альбумина, обработанные так же, как и опытная проба. Метод позволяет обнаружить в моче белок, содержание которого составляет 2 мкг в пробе.
Проба на гипераминоацидурию
Выделение аминоазота за сутки не превышает 1–2 мг/кг. В ночное время выделяется 2/3–3/4 суточного количества аминоазота.
Гипераминоацидурия возникает при наследственной (синдром Дебре – де Тони – Фанкони) и приобретенной (гломерулонефрит) патологии в почках, а также при некоторых заболеваниях печени. Для выяснения причины гипераминоацидурии необходимы определение концентрации аминокислот в крови и моче и вычисление их клиренса.
Принцип метода
Аминокислоты при нагревании с нингидрином образуют соединения, окрашенные в сине-фиолетовый цвет.
Необходимые реактивы
1. Нингидрин.
2. Ацетон.
3. Уксусная кислота (ледяная).
4. Раствор нингидрина: 5 г нингидрина на 1 л смеси (к 0,5 г нингидрина прибавляют 95 мл ацетона, 1 мл ледяной уксусной кислоты и 4 мл дистиллированной воды).
5. Гликолол (глицин).
6. Раствор глицина: 150 мг глицина растворяют в 100 мл дистиллированной воды (1 мл раствора содержит 1,5 мг глицина, что соответствует 0,28 мг аминоазота). Из данного раствора глицина готовят серию разведений: 1; 3, 6; 9; 18; 24; 36; 54 мл раствора глицина доводят до 100 мл водой. Приготовленные растворы соответствуют 0,28; 0,84; 1,68; 2,52; 5,04; 6,72; 10,08; 16,12 мг аминоазота в 100 мл.
Растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 месяца.
Ход исследования
На фильтровальную бумагу наносят 0,02 мл мочи и после подсушивания окрашивают раствором нингидрина, затем высушивают на воздухе до полного исчезновения запаха уксусной кислоты и помещают в сушильный шкаф при температуре 60 °C на 15 мин.
Окраску опыта сравнивают с окраской стандартных растворов глицина, обработанных так же, как образец мочи, для чего берут по 0,02 мл каждого раствора. Результаты выражают в миллиграммах аминоазота, выделенного с мочой за сутки.
Обнаружение цистина и гомоцистина
Принцип метода
Азид натрия и йод образуют комплекс бурого цвета, который обесцвечивается в присутствии цистина и гомоцистина.
Необходимые реактивы
1. Натрия азид.
2. Йод кристаллический.
3. Раствор йода: 12,69 г кристаллического йода отвешивают в бюксе, растворяют в насыщенном растворе йодида калия (37 г KI в 26 мл дистиллированной воды), переносят в колбу и доливают дистиллированной водой до 1 л. Можно использовать фиксанал йода 0,1 н.
4. Этиловый спирт 96 %-ный.
5. Раствор азида натрия: 1,5 г азида натрия растворяют в 50 мл раствора йода и доводят объем этиловым спиртом до 100 мл. Раствор хранят в посуде темного стекла в холодильнике.
Ход исследования
Каплю мочи наносят на фильтровальную бумагу и после высушивания добавляют 1 каплю раствора азида натрия. В течение 5 мин наблюдают за исчезновением бурой окраски.
По времени исчезновения окраски судят о наличии аминокислот в исследуемой моче. Для полуколичественной оценки результатов окраску пробы можно сравнивать с цветной шкалой, для получения которой готовят раствор цистина и гомоцистина, содержащий 0,6 мг каждой аминокислоты в 1 мл.
Из этого раствора готовят растворы с содержанием аминокислот от 0,6 до 0,3 мг/мл. Нижняя граница чувствительности пробы – 0,3 мг/мл.
Бурая окраска в норме исчезает через 2–3 мин после добавления азида натрия.
Ложноположительную реакцию дают ангидрид аргинин-янтарной кислоты, ацетон, некоторые лекарственные препараты.
Тест положительный при наследственной или приобретенной цистинурии или гомоцистинурии, в этом случае окраска остается более 5 мин.
Обнаружение пролина и других аминокислот
Пролинурия возможна при патологии почек и как симптом наследственного нарушения обмена.
Принцип метода
Изатин образует с некоторыми аминокислотами специфически окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. Изатин.
2. Ацетон.
3. Раствор изатина в ацетоне 0,2 г/л (раствор хранят в холодильнике при температуре 4 °C.
4. Соляная кислота 1 моль/л.
Ход исследования
Фильтровальную бумагу пропитывают раствором изатина в ацетоне и высушивают. Затем наносят на нее одну каплю мочи и высушивают при 100 °C в течение 10 мин, смачивают раствором соляной кислоты и промывают водой.
Сине-серую окраску дает повышенное содержание фенилаланина, коричневую – триптофан, пурпурную – смесь различных аминокислот, а появление синей окраски в виде ободка свидетельствует о присутствии в моче свободного пролина (не менее 0,1 мг/мл). Можно сравнивать интенсивность окраски с цветной шкалой. Для приготовления стандартных растворов, содержащих от 0,1 до 0,5 мг/мл соответствующих аминокислот, используют растворы аминокислот с исходной концентрацией 0,5 мг соответствующей аминокислоты в 1 мл раствора.
Обнаружение кетокислот (проба с треххлористым железом)
Кетокислоты в большом количестве выделяются с мочой при нарушении различных обменных процессов, в частности цикла Кребса; производные фенотиазида или салицилата – при отравлениях ими; 3-оксиантраниловая кислота – при нарушениях обмена триптофана.
Принцип метода
Треххлористое железо в присутствии НСl дает с кетокислотами специфически окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О), 10 %-ный раствор.
2. НСl, 10 %-ный раствор.
3. Аммиак водный концентрированный.
4. Магния хлорид (MgCl2 × 6Н2О): к 11 г хлорида магния прибавляют 20 мл концентрированного водного аммиака и объем доводят водой до 1 л.
Ход исследования
Вариант I – к 0,5 мл мочи добавляют 0,25 мл раствора треххлористого железа, при положительной реакции появляется темно-зеленый осадок.
Вариант II – для связывания фосфатов, мешающих реакции, к 4 мл мочи прибавляют 1 мл раствора хлорида магния, перемешивают и через 5 мин фильтруют. К фильтрату добавляют по 2 капли раствора соляной кислоты и раствора треххлористого железа; в течение 5 мин наблюдают развитие окраски.
О наличии кетокислот судят по характеру окраски, однако следует иметь в виду, что окраска может развиваться и за счет других соединений (табл. 37).
Таблица 37
Цветная реакция различных соединений с треххлористым железом
Обнаружение кетокислот по реакции с 2,4-динитрофенилгидразином
Принцип метода
Кетокислоты образуют с 2,4-динитрофенилгидразином окрашенные гидразоны.
Необходимые реактивы
1. НСl, 2 моль/л.
2. 2,4-динитрофенилгидразин (2,4-ДНФГ): 2 г 2,4-ДНФГ растворяют в 1 л 2 моль/л НСl.
3. Диэтиловый эфир.
4. Натрия карбонат (NaО2СО3), 100 г/л.
Ход исследования
Смешивают 1 мл раствора 2,4-ДНФГ и 0,25 мл мочи. Через 10 мин прибавляют 1,25 мл диэтилового эфира и перемешивают, эфирный слой отсасывают и переносят в пробирку, куда добавляют равный объем раствора натрия карбоната. Содержимое пробирки перемешивают.
При положительной пробе развивается окраска от желтой до оранжево-коричневой. В норме проба отрицательная, окраска не развивается.
Обнаружение гомогентизиновой кислоты
Принцип метода
В щелочной среде гомогентизиновая кислота окисляется с образованием соединений сине-фиолетового цвета.
Необходимый реактив
Едкий натр, 100 г/л.
Ход исследования
К 0,5 мл мочи прибавляют 3–4 капли раствора едкого натра, результат оценивают через 1–2 мин.
При положительной реакции развивается сине-фиолетовое окрашивание, при отрицательной окраска не возникает.
Обнаружение индикана
Принцип метода
Превращение индикана в индоксил после гидролиза эфирной связи сильной минеральной кислотой и последующее окисление индоксила треххлористым железом с образованием окрашенного соединения.
Необходимые реактивы
1. Свинца ацетат (СН3СОО)Рb × 3Н2О), 100 г/л раствора.
2. НСl концентрированная.
3. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О).
4. Реактив Обермейра: 0,4 г треххлористого железа растворяют в 100 мл концентрированной НСl.
5. Хлороформ.
6. Натрия тиосульфат (Na2S2O3 × 5H2O), 200 г/л раствора.
Ход исследования
К 4 мл мочи прибавляют 0,4 мл раствора ацетата свинца для осаждения желчных пигментов, солей и других веществ, мешающих реакции.
Фильтруют, 1–2 мл фильтрата смешивают с равным объемом реактива Обермейра, прибавляют 0,5–1 мл хлороформа и осторожно перемешивают.
Если слой хлороформа окрашивается в синий или красный цвет, его отсасывают и добавляют к нему 2–3 капли тиосульфата натрия.
При положительной реакции окраска хлороформа не исчезает после добавления тиосульфата натрия. В норме реакция отрицательная.
Обнаружение фруктозы (проба Селиванова)
Принцип метода
При нагревании фруктозы с резорцином в кислой среде образуются соединения, окрашенные в красный цвет.
Необходимые реактивы
1. НСl, 1 моль/л.
2. Резорцин: 5 г в 1 л, 1 моль/л раствора НСl.
Ход исследования
К 2 мл мочи приливают 1 мл раствора резорцина и нагревают до закипания.
При положительной пробе развивается интенсивное красное окрашивание. В норме окраска не появляется.
Оценку пробы проводят в момент закипания, так как при длительном кипении окраска может развиться при наличии глюкозы. Пищевая нагрузка медом и фруктами может дать положительную пробу.
Обнаружение лактозы и мальтозы (проба Велька)
Принцип метода
Лактоза и мальтоза в щелочной среде при нагревании с аммиаком образуют окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. Аммиак водный концентрированный.
2. Калий едкий, 200 г/л раствора.
Ход исследования
К 5 мл мочи приливают 2,5 мл аммиака и 0,2 мл раствора едкого калия. Нагревают на водяной бане в течение 30 мин при температуре 60 °C.
При положительной реакции на лактозу появляется коричневая окраска, а при наличии мальтозы – красная окраска. В норме окраска не развивается.
Обнаружение пентоз (проба Биаля)
Принцип метода
Пентозы с орцином и треххлористым железом при нагревании в кислой среде образуют окрашенные соединения.
Необходимые реактивы
1. 5-метилрезорцин (орцин).
2. НСl концентрированная.
3. Железо треххлористое (FeCl3 × 6Н2О), 100 г/л раствора.
4. Реактив Биаля: 1 г орцина растворяют в 500 мл соляной кислоты и добавляют 1 мл раствора треххлористого железа.
Ход исследования
Нагревают 1 мл мочи до кипения с 5 мл реактива Биаля.
При положительной пробе появляется яркая желто-зеленая окраска. В норме проба отрицательная.
Обнаружение глюкозы, фруктозы, пентозы, лактозы и мальтозы в моче может быть результатом врожденных ферментопатий, а лактоза и мальтоза могут быть обнаружены при нарушении их гидролиза в тонкой кишке.
Обнаружение гликозоаминогликанов (проба с метилтриметил-аммония бромидом)
Принцип метода
Метилтриметиламмония бромид (ЦТАБ) с гликозамино-гликанами образует в кислой среде белый осадок.
Необходимые реактивы
1. Лимонная кислота.
2. Едкий натр.
3. Цитратный буфер, 1 ммоль/л, рН 5,7: в небольшом количестве воды растворяют 210 г лимонной кислоты, добавляют 120 г едкого натра, растворяют, охлаждают и доливают водой до 1 л.
4. Раствор ЦТАБ, 25 г в 1 л цитратного буфера.
Ход исследования
К 5 мл мочи приливают 1 мл раствора ЦТАБ и в течение 30 мин наблюдают образование осадка. Пробу проводят при комнатной температуре, для исследования берут свежевыделенную мочу.
Проба считается положительной при образовании осадка. В норме проба отрицательная. Следует учитывать, что проба дает 40 % ложноположительных результатов.
Определение кальция (проба Сулковича)
Высокое содержание кальция в моче может быть при гипервитаминозе D и гиперпаратиреозе.
Принцип метода
Ионы кальция со щавелевой кислотой образуют нерастворимую щавелевокислую соль.
Необходимые реактивы
1. Щавелевая кислота.
2. Аммония оксалат.
3. Уксусная кислота ледяная.
4. Реактив Сулковича: в 50 мл дистиллированной воды растворяют по 2,5 г щавелевой кислоты и оксалата аммония, добавляют 5 мл ледяной уксусной кислоты и доводят объем раствора до 150 мл.
Ход исследования
Смешивают по 0,5 мл мочи и реактива Сулковича. Через 1–2 мин оценивают степень помутнения.
Степень помутнения оценивают визуально:
– 0 – отсутствие помутнения;
– 1 – слабое помутнение;
– 2 – умеренное помутнение;
– 3 – значительное помутнение;
– 4 – резко выраженное помутнение.
О повышенном содержании кальция в моче свидетельствуют 3 и 4-я степени помутнения.
После выявления положительных результатов описанных тестов больной нуждается в тщательном обследовании с помощью точных количественных методов в специализированных учреждениях.
