Текст книги "250 показателей здоровья"

Клетки эпендимы желудочков мозга. Клетки эпендимы обнаруживаются в ликворе часто. В люмбальной жидкости их можно встретить в тех случаях, когда при спинальном проколе выпускается более 7 мл ликвора.

Опухолевые клетки

Клетки первичных и метастатических опухолей обнаруживают в камере и в окрашенном препарате. Изучение данных клеток требует специальной подготовки.

Кристаллы находят в спинномозговой жидкости редко. В случае распада опухоли в содержимом кисты обнаруживают кристаллы гематоидина, билирубина, холестерина.

Элементы эхинококка – крючья, сколексы и обрывки оболочки пузыря – могут быть при множественном эхинококкозе оболочек (их находят очень редко).

Бактериоскопическое исследование на микобактерии туберкулеза

Исследование проводится подобно другим биологическим жидкостям, но при подозрении на туберкулезный менингит возможно проведение следующих дополнительных проб.

Триптофановая реакция

Положительный результат наблюдается при туберкулезном менингите, в отличие от менингитов другой этиологии. Гнойный ликвор для проведения этой реакции непригоден.

Реакция Левинсона также предложена для распознавания туберкулезного менингита.

Микробиологическое исследование спинномозговой жидкости

Микробиологическое исследование спинномозговой жидкости (СМЖ) необходимо в случаях, подозрительных на менингит, а также в случае комы и при неврологических симптомах неясного генеза.

СМЖ в норме стерильна, поэтому положительный результат – это всегда расшифровка этиологического диагноза, при помощи которого можно в ряде случаев предотвратить смертельный исход заболевания.

Причины менингитов очень разнообразны. Наиболее часто из ЦСЖ выделяют следующие микроорганизмы:

1) при гнойных менингитах – N. meningitidis, S. pneumoniae, S. aureus, Streptococcus групп А, В., Proteus, Pseudomonas, E. coli, Klebsiellae, Achromobacter и др.;

2) при серозных менингитах – M. tuberculosis, Leptospira, Toxoplasma gondii, вирусы Cryptococcus neoformans (при вирусологическом исследовании).

Взятие проб СМЖ должно проводиться при четком соблюдении правил асептики, исключающих кожное и воздушное осеменение СМЖ. Первые капли СМЖ (до 1 мл) собирают в пробирку и отправляют на цитологическое исследование. Для посева используют следующую порцию жидкости, собираемую в стерильную пробирку в количестве 2,5 мл. При подозрении на туберкулезную или грибковую этиологию менингита выпускается не менее 10 мл ЦСЖ.

Учитывая, что один из важных возбудителей менингита (N. Meningitidis) очень чувствителен к охлаждению, взятые пробы доставляются в лабораторию как можно быстрее, а до этого хранятся строго при 37 °C. Во всех случаях, подозрительных на менингит, следует брать для микробиологического исследования материал из возможного первичного очага инфекции: раны после нейрохирургических и других оперативных вмешательств, мазки из носоглотки, среднего уха, производить посев крови.

При нелеченых случаях менингита по внешнему виду могут быть выявлены такие возбудители, как S. pneumoniae, N. meningitidis, H. influenzae (полиморфные грамотрицательные коккобациллы). Присутствие в мазках неспоровых четко грамположительных коротких объемных палочек позволяет заподозрить L. monocytogenes в качестве возбудителя менингита. Результаты первичной микроскопии немедленно сообщает врач-лаборант лечащему врачу, который впоследствии определяет тактику лечения.

Посев СМЖ производят на питательные среды Как отмечалось, в основном выделение микроорганизмов из СМЖ говорит об их этиологической роли. Иногда выделение бактерий условно-патогенной группы бывает связано с осеменением ликвора при его взятии. В таких случаях для избежания диагностической ошибки необходимо повторить исследование. Нужно помнить, что при менингите, вызванном условно-патогенными видами, проведение лечебных мероприятий не оказывает такого быстрого стерилизующего эффекта, как при патогенных возбудителях. Кроме того, необходимо провести количественную оценку бактериального роста.

Отсутствие микрофлоры в первичных мазках СМЖ и отрицательный результат роста (или рост единичных колоний) на плотных питательных средах при наличии роста в жидких средах могут говорить о нарушении правил асептики при взятии СМЖ или о небольшом обсеменении ликвора.

Глава 6. Исследование мокроты

Мокротой называют отделяемое дыхательных путей (гортани, бронхов, трахеи и легких), возникающее при различных заболеваниях дыхательной системы и выделяемое с кашлем. Лабораторное исследование мокроты включает в себя внешний осмотр, измерение количества, изучение физических и химических свойств мокроты, микроскопическое, бактериологическое и бактериоскопическое исследование, а также цитологическое исследование. Необходимо помнить об обязательных правилах сбора мокроты для дальнейшего исследования: мокроту собирают после многократного полоскания ротовой полости и горла в сухую чистую баночку или сразу в чашку Петри в утренние часы (обязательно до чистки зубов и до приема пищи). Сбор мокроты за сутки или другой промежуток времени нецелесообразен, поскольку длительное стояние ведет к быстрому размножению микроорганизмов и разложению клеток. Если есть необходимость, то мокроту помещают в холодильник при температуре 3–5 °C. Проводя макроскопическое исследование мокроты, акцентируют внимание на количестве мокроты, ее характере, цвете, запахе, консистенции, имеется ли слоистость или какие-нибудь включения. Характер мокроты зависит от ее состава. В норме она представляет собой полупрозрачную вязкую жидкость без запаха. Мокрота может быть слизистая – состоит из слизи (продукт жизнедеятельности желез дыхательной системы). Такого рода мокрота может выделяться при острых бронхитах (воспалениях) дыхательных путей, разрешении приступа бронхиальной астмы. Слизисто-гнойная мокрота представляет собой массу из гноя и слизи, в данном случае слизь преобладает как компонент, а гной включен в виде глыбок или полосок. Такая мокрота встречается при хронических бронхитах и бронхитах курильщиков со стажем, трахеитах и пневмониях. Гнойно-слизистая мокрота – с преобладанием гноя, а слизь имеет вид длинных тяжей, появляется при бронхоэктатической болезни, вскрывшихся абсцессах легкого и др. Гнойная мокрота не имеет слизи и представляет собой густую сливкообразную или жидкую массу гноя. Может появляться при прорыве абсцесса в бронх, прорыве эмпиемы (гнойное воспаление) плевры (серозная оболочка полости легких). Слизисто-кровянистая мокрота состоит в основном из слизи с прожилками крови или кровяных клеток. Данная мокрота появляется при воспалении верхних дыхательных путей, пневмониях, раке легкого. Слизисто-кровянисто-гнойная мокрота содержит слизь, гной, кровь в примерно равных пропорциях. Подобная мокрота наблюдается при туберкулезе, бронхоэктазах, раке легкого, грибковом поражении легких. Кровавая мокрота встречается при различных легочных кровотечениях (ранения легкого, рак легких, злокачественные новообразования и др.).

Серозная мокрота – это пропотевающая в полость бронхов жидкая часть крови (плазма), выделяется при отеке легкого различного происхождения, отравлении болевыми отравляющими веществами и химическими токсинами. Консистенция мокроты напрямую связана с характером мокроты и может быть густой, жидкой и вязкой. Такое ее свойство, как вязкость, зависит от количества и качества слизи. Например, много слизи при бронхиальной астме и бронхитах, бронхопневмониях, поэтому мокрота при этих заболеваниях вязкая. Вязкость мокроты обусловлена высоким содержанием форменных элементов крови (клеток) – лейкоцитов, покровных клеток (эпителия) дыхательных путей (бронхоэктатическая болезнь, абсцесс, туберкулез легких, хронические бронхиты). Жидкая мокрота иногда бывает в большом количестве, когда пропотевает много плазмы (воспаление легких, кровотечение, отравление, отек легких). Еще одно важное свойство мокроты при отеке легких – она часто розоватая (из-за пропотевания эритроцитов) и пенистая (так как образуется в альвеолах и, поднимаясь вверх, смешивается с воздухом; именно поэтому при отеке легких внутривенно вводят спирт, как пеногаситель). Жидкая или серозная мокрота при отеке легких отличается высокой клейкостью из-за большого содержания белка. Количество мокроты варьирует в широких пределах. Величина отдельных порций и ее суточное количество зависят от характера заболевания, а также от способности больного к отхаркиванию. Скудная мокрота будет только в начале бронхита и пневмонии, затем, по мере развития бронхита и вступления пневмонии в стадию разрешения, мокрота появится, причем при эффективном лечении пневмонии мокроты может быть довольно много. При отстаивании гнойной мокроты можно отметить разделение или расслоение мокроты на несколько слоев, например на два (гной и серозная жидкость) или на три (гной, слизь и серозная жидкость). Двухслойная мокрота характеризует абсцесс легких, в то время как трехслойная характерна для бронхоэктатической болезни, туберкулезных каверн. Слизистая мокрота прозрачная или стекловидная. Слизисто-гнойная – стекловидная с желтоватым оттенком, поскольку ее основной частью является слизь, а гной включен в виде комочков. Гнойно-слизистая мокрота – зеленовато-желтая, поскольку в ней преобладает гной. Гнойная мокрота имеет насыщенно зелено-желтую окраску. Слизисто-кровянистая мокрота – стекловидная с розоватым или ржавым оттенком. В данном случае цвет мокроте придает пигмент крови, а стекловидность – слизь. Слизисто-гнойно-кровянистая мокрота – стекловидная (преобладает слизистый компонент) с желтыми включениями (гной), с прожилками красного цвета (свежая кровь) или ржавым оттенком (измененная кровь). Кровавая мокрота – насыщенно красного цвета. Отличительным признаком является обильность и пенистость, обусловленная большим содержанием пузырьков воздуха. При распаде злокачественных новообразований может быть мокрота в виде красного сгустка. Серозная мокрота прозрачно-желтая, пенистая. Мокрота с примесью инородных частиц имеется у людей со специфическими профессиями (шахтер, мукомол, работники цементных заводов). Свежевыделенная мокрота, как правило, не имеет никакого запаха. Запах она приобретает при длительном стоянии, а также при задерживании мокроты в бронхах, образованных полостях легких (что обусловлено жизнедеятельностью многочисленных микроорганизмов, вызывающих распад белков до неприятно пахнущих веществ). Специфический неприятный запах мокрота приобретает при вялотекущих хронических заболеваниях (бронхитах) с плохой эвакуацией мокроты, резкий неприятный запах – при бронхоэктатической болезни, абсцессе легкого, туберкулезном процессе, распаде злокачественных новообразований. Особенно тяжелый, зловонный запах мокрота приобретает при гангрене легкого и при озене (зловонном насморке). Выявление различных включений, паразитов, патологических элементов удобнее производить наглядно. Удобнее всего рассматривать в чашке Петри на белом или черном фоне, при этом лучше воспользоваться лупой. Подобным образом в мокроте можно найти:

1) спирали Куршмана при микроскопическом исследовании представляют собой прозрачные, белые, извитые трубчатые тела, резко выделяющиеся на фоне бесформенной мокроты, являющиеся диагностическим признаком нелеченой бронхиальной астмы (если приступ удушья длился несколько часов);

2) фибринозные свертки – древовидные образования красноватого или беловатого цвета длиной около 1–2 мм, имеющие эластическую консистенцию, компонентами которых являются слизь и фибрин. Встречаются при бронхитах;

3) рисовидные тельца, или линзы Коха, – плотные зеленовато-желтые образования творожистой консистенции величиной со среднюю горошину, чуть меньше. Они состоят из мертвых клеток, туберкулезных бактерий и соединительнотканных волокон. Обнаруживаются в мокроте при кавернозном туберкулезе легких;

4) гнойные пробки, или пробки Дитриха, представляют собой глыбки желтовато-сероватого или белого цвета величиной с булавочную головку со зловонным запахом, состоящие из мертвых клеток, бактерий и кристаллов жирных кислот. Чаще всего встречаются при бронхоэктазах, гангренозном распаде легкого;

5) дифтерийные пленки – сероватые пленки (иногда бурые), состоящие из фибрина и отмерших клеток;

6) отмершие кусочки легкого – черные образования разнообразной величины, содержащие соединительнотканные волокна и эластические волокна, встречаются при абсцессе и гангрене легкого;

7) кусочки опухоли легкого – часто имеют вид мелких комочков, окрашенных кровью;

8) друзы грибка актиномицета представляют собой мелкие зернышки сероватого и беловатого цвета, окутанные гноем в скудном количестве;

9) иногда можно выявить части пузыря эхинококка (паразита) – образования, пропитанные кровью или солями кальция, встречаются в мокроте при свежем разрыве эхинококковой кисты легкого и выкашливании обильного количества прозрачной жидкости;

10) инородные тела попадают случайно при вдыхании (например, косточек вишни, ореховой скорлупы и т. д.).

Таким образом, при микроскопическом исследовании можно обнаружить большинство патологических изменений, что уже позволяет поставить предварительный, а иногда и точный диагноз. Микроскопическое исследование мокроты проводят в свежих неокрашенных или окрашенных фиксированных препаратах. При приготовлении необходима тщательная подготовка и сбор исследуемого материала. Прокаленной и остуженной ложечкой или специальной металлической петлей из мокроты поочередно отбирают все подозрительные частицы, зернышки, кровяные прожилки, глыбки и готовят из них препараты, помещая на предметное стекло и под микроскоп. Выбранные частицы мокроты, стараясь не размазывать, накрывают покровным стеклом и слегка придавливают чистым концом ложечки. Для исследования материал необходимо брать в таком количестве, чтобы препарат не был слишком толстым и при надавливании на покровное стекло его содержимое не выступало за края. Если это произошло, то рядом накладывают второе, сдвинув немного первое стекло. Заготовленный препарат изучают сначала под малым увеличением микроскопа, а затем – под большим увеличением. Элементы, обнаруживаемые в мокроте, можно подразделить на три большие группы: клеточные, волокнистые и кристаллические образования. Плоский эпителий – отмерший эпителиальный (поверхностный) покров ротовой полости, носоглотки, надгортанника и голосовых связок, имеет вид плоских клеток с пузырчатым ядром и однородной внутренней средой. Отдельные клетки эпителия встречаются всегда, а в значительных количествах – при примеси слюны (неправильный сбор материала для исследования) или воспалительных процессах в ротовой полости. Цилиндрический эпителий – клетки слизистой оболочки бронхов и трахеи, имеет вид удлиненных клеток с заостренным и вытянутым концом, с расположенным внизу овальным ядром. Эти клетки снабжены венчиком из ресничек (реснички можно обнаружить только в свежайшей мокроте). Иногда цилиндрический эпителий трансформируется и приобретает веретенообразную форму с концом в виде длинной нити. Цилиндрический эпителий встречается в мокроте в значительных количествах при остром приступе бронхиальной астмы, остром бронхите. Альвеолярный эпителий в мокроте практически не встречается. Круглые клетки в 2–3 раза больше по размеру, чем лейкоцит, иногда эти клетки трактуются как макрофаги. Макрофаги – это клетки иммунной системы, округлой или овальной формы, содержащие эксцентрично расположенное ядро и внутреннюю среду с разнообразными включениями. Их можно обнаружить при различных воспалительных заболеваниях в бронхах и легочной ткани (пневмонии, бронхиты, профессиональные заболевания легких). Макрофаги, содержащие гемосидерин (включение, образующееся в клетках крови в результате заболеваний), имеют во внутренней среде золотисто-желтые включения. С точностью их определяет реакция с берлинской лазурью. Кусочек мокроты помещают на предметное стекло, добавляют 1–2 капли 5 %ного раствора железисто-синеродистого калия. Гемосидерин, расположенный внутри клеток, окрашивается в голубой и сине-зеленый цвет. Данные клетки встречаются в мокроте больных с застойными процессами в малом круге кровообращения, инфарктами легкого и кровоизлияниями. Гигантские клетки размером около 60 мкм, овальные или круглые с большим количеством ядер (5—15), могут обнаруживаться крайне редко при туберкулезе легких. Атипичные клетки – это крупные клетки с одним или несколькими ядрами с явными признаками отличия от нормальных. В мокроте представлены в виде одиночных клеток или скоплений. При находке данных клеток всю оставшуюся мокроту подвергают специальному подробному цитологическому исследованию. Лейкоциты – круглые клетки диаметром до 15 мкм с плохо различимым ядром и обильной зернистостью. Представлены почти в каждой мокроте; в слизистой – это единичные клетки, а в гнойной покрывают все поле зрения. Они свидетельствуют об активности воспалительных процессов в легких. Эритроциты – круглой или овальной формы клетки, с желтым оттенком (свежие) или бесцветные (измененные и утратившие пигмент), диаметром меньше лейкоцитов, с обязательным отсутствием зернистости, имеют двухконтурность оболочки, способны к преломлению цвета. В любой мокроте присутствуют единичные эритроциты, а в большом количестве обнаруживаются в мокроте при таких заболеваниях, как легочное кровотечение, инфаркт легкого, застойные явления в легких и др. К волокнистым образованиям относятся эластические волокна, фибринозные волокна и спирали Куршмана. Эластические волокна имеют вид извитых, блестящих, преломляющих свет тонких нитей, образующих пучки и повторяющих (правда, редко) строение легочной ткани. Эти волокна часто располагаются на фоне лейкоцитов и погибших тканей. Эластические волокна являются свидетельствами распада легочной ткани и выявляются при туберкулезе, абсцессе и гангрене, новообразованиях в легких. В некоторых случаях при этих заболеваниях можно встретить коралловые волокна (грубые, ветвящиеся образования с неровными утолщениями вследствие отложения на волокнах кристаллов жирных кислот), а также обызвествленные эластические волокна – грубые, пропитанные солями извести вытянутые образования. Для обнаружения эластических волокон в мокроте необходимо к 20–30 мл 10 %-ного раствора едкой щелочи добавить исследуемый материал и кипятить до растворения (эластические волокна при этом не будут растворяться). После охлаждения в жидкость добавляют 5–7 капель 1 %-ного раствора красителя эозина и подвергают центрифугированию (вращению на большой скорости). Затем осадок изучают под микроскопом. При обнаружении волокон необходимо быть осторожным, поскольку можно обнаружить эластические волокна из пищевых продуктов. Диагностическое значение имеют лишь те волокна, которые сгруппированы пучками и обнаруживают строение альвеолярной (легочной) ткани. Фибринозные волокна – это тончайшие волоконца, которые хорошо просветляются при добавлении 30 %-ного раствора уксусной кислоты, растворяются под действием эфира. Как правило, их обнаруживают при фибринозном бронхите, туберкулезе, грибковых поражениях легких и крупозной пневмонии. Спирали Куршмана представляют собой уплотненные, закрученные образования из слизистых компонентов. Их наружная рыхлая часть называется мантией, внутренняя, более плотная – центральной осевой нитью. Очень редко обнаруживаются только тонкие центральные нити без мантии и спирально извитые волоконца без нити. При исследовании под большим увеличением по периферии можно обнаружить лейкоциты, кристаллы Шарко – Лейдена. Выявить спирали Куршмана можно при патологии, сопровождающейся сужением просвета бронхов и их спазмом, главным образом при бронхиальной астме. К кристаллическим образованиям относятся различные кристаллы. Кристаллы Шарко – Лейдена встречаются в мокроте вместе с клетками аллергии (эозинофилы) и имеют вид блестящих, гладких, бесцветных ромбов различных размеров, иногда с округлыми краями. Образование кристаллов Шарко – Лейдена связывают с распадом эозинофильных клеток, считают их продуктом кристаллизации белковых элементов данных клеток. Очень часто свежевыделенная мокрота не содержит кристаллов Шарко – Лейдена, они формируются в закрытой таре спустя 24–48 ч. При бронхиальной астме наличие данных образований характерно в период обострения. Помимо этого они встречаются при глистных поражениях легких, редко – при крупозной пневмонии или бронхитах.

Кристаллы гематоидина имеют форму тонких иголок (редко – пучков или звезд), а также ромбов золотисто-желтого цвета. Данные образования являются продуктами распада гемоглобина, формируются внутри гематом и больших кровоизлияний, в отмерших пластах клеток (если там была кровь). В приготовленных препаратах мокроты кристаллы гематоидина (включение в клетках, образующееся при заболеваниях) располагаются на фоне мертвых тканей и эластических волокон. Кристаллы гематоидина важно отличать от зерен гемосидерина – золотистых включений во внутренней среде макрофагальных клеток, дающих положительную реакцию с берлинской лазурью.

Кристаллы холестерина – бесцветные четырехгранные, похожие на таблички образования, возникающие при разложении жироперерожденных клеток, застое мокроты в различных полостях, располагаются на фоне мертвой ткани (туберкулезное поражение, новообразования, абсцессы, эхинококковые кисты и др.). Кристаллы жирных кислот представлены в виде длинных тонких иголочек, их спутником часто становятся капельки жира. Они содержатся в гнойной мокроте (пробки Дитриха), образуются при нахождении мокроты в полостях (бронхоэктатическая болезнь, абсцесс). Изучение окрашенных препаратов: собранные из 4–6 различных мест гнойные частицы мокроты помещают на стекло, аккуратно растирают другим предметным стеклом до однородной массы, высушивают на воздухе, фиксируя над пламенем горелки. Препараты окрашивают разными способами, микроскопируют с иммерсионной системой (на препарат добавляют каплю стерильного масла или глицерина, затем рассматривают под объективом). Для изучения и обнаружения клеток крови в мокроте используют несколько типов окраски. Этот метод имеет много погрешностей, используется как ориентировочный. Окраску по Романовскому – Гимзе используют для исследования отдельных клеточных элементов крови в мокроте. В данном случае удается обнаружить следующие виды клеток: нейтрофилы – клетки, составляющие основную массу лейкоцитов. При тяжелых заболеваниях легочной системы встречаются измененные формы легкого (бронхоэктазы, туберкулез, абсцесс). Появление в значительном количестве измененных форм при пневмонии указывает на начало распространения патологического процесса, а их уменьшение говорит об улучшении и процессах выздоровления. Лимфоциты, в свою очередь, могут быть не только из крови, но и тканевого происхождения – из лимфоидной ткани гортани и бронхов. Присутствуют в мокроте в больших количествах при туберкулезе, коклюше, злокачественных новообразованиях лимфоидной ткани мезенхимального происхождения (лимфосаркомы). Эозинофилы, располагающиеся в виде скоплений, встречаются при бронхиальной астме. Базофилы и моноциты (фракции лейкоцитов) обнаруживаются в единичных экземплярах. Признаком легочного кровотечения служит лишь большое количество этих клеток (они выстраиваются в виде скоплений, опутанных слизью). Окраска препаратов для бактериоскопического исследования проводится разными способами и имеет довольно важное диагностическое значение. Стрептококки, стафилококки, палочки Фридлендера и другие микроорганизмы выявляются в препарате мокроты, окрашенном по Граму. Правильность нахождения этих бактерий всегда должна подтверждаться бактериологическим исследованием с посевом бактерий. Окраска по Граму – Синеву: окрашивают карболовым раствором генцианового фиолетового в течение 1,5–2 мин. (препарат накрывают фильтровальной бумагой и сверху наливают краситель). Убирают фильтровальную бумагу, опускают в раствор Люголя на 2–3 мин., затем обесцвечивают в спирте до сероватого цвета, промывают в воде. Потом докрашивают 10 %-ным раствором карболового фуксина в течение 10–15 с, промывают в воде и высушивают над пламенем горелки. Бактерии, окрашивающиеся по Граму в синий цвет, называются грамположительными, а неокрашивающиеся (имеющие красную окраску) – грамотрицательными. К грамположительным бактериям относятся стрептококки, стафилококки, палочки дифтерии. К грамотрицательным микроорганизмам относятся клебсиелла, протей и др. Стрептококки имеют вид мелких круглых бактерий, при микроскопическом исследовании располагаются по цепочке или отдельно. Вызывают такие тяжелые заболевания легких, как крупозная пневмония, абсцесс легкого или являются сапрофитами, т. е. не вызывают ничего. Стафилококки имеют сходный внешний вид со стрептококками, вызывают те же заболевания, под микроскопом они располагаются в виде виноградных гроздей либо отдельно. Очень часто при посеве мокроты можно увидеть как стрептококков, так и стафилококков, поскольку в настоящее время заболевания легких вызывают много микробов (микст-инфекция). Палочки Фридлендера имеют вид толстых коротких палочек, расположенных по паре и образующих слизистые капсулы; являются возбудителями особенно тяжело протекающей пневмонии. Большое значение бактериоскопическое исследование приобрело в связи с распространением туберкулеза в нашей стране. Применяется для обнаружения микобактерий туберкулеза. Существует несколько методов выявления возбудителей в мокроте. Исследование микобактерий методом люминесцентной микроскопии: туберкулезные бактерии, окрашенные специальным красителем ауромином, люминесцируют (светятся) под влиянием ультрафиолетовых лучей, видны как золотые палочки. Данный метод позволяет обнаружить микроорганизмы достаточно быстро, он более надежен и чувствителен. Часто в препаратах не удается найти микобактерии туберкулеза. В этих случаях прибегают к бактериологическому исследованию: небольшое количество исследуемой мокроты помещают в посуду (чашку) с питательной средой, на которой растут возбудители туберкулеза. Микобактерии растут на особых средах, содержащих яичный белок и глицерин, или сложных, состоящих из искусственно полученных питательных веществ. Все бактерии, вызывающие заболевания, теплолюбивые, поэтому для их роста нужна постоянная температура 37 °C. Микроорганизмы растут очень медленно, их можно увидеть через 28–40 дней. На твердых питательных средах они образуют сухие, сморщенные округлые колонии (скопление большого количества бактерий, видимых невооруженным глазом) в виде кос или жгутов. В жидкой питательной среде туберкулезные палочки растут быстрее (на 7– 10-й день), образуя поверхностную сухую бугристую пленку. Данный метод позволяет выявить микобактерии, однако он слишком трудоемок и относительно дорог, применяется для определения возможных методов лечения и проводится лабораторией туберкулезных диспансеров. В специализированных исследовательских лабораториях иногда применяют метод определения микобактерий туберкулеза путем заражения мышат-сосунков (биологический метод). Однонедельным мышатам в брюшко вводят выбранное количество мокроты от обследуемого. Через определенное время мышата погибают, при вскрытии делают мазок-отпечаток из тел павших животных и обнаруживают размножившиеся бактерии. Этот метод исследования, как правило, имеет научно-исследовательский характер и используется в рамках больших экспериментов. Наиболее достоверный и наиболее дорогостоящий метод выявления возбудителей туберкулеза – метод ДНК-зондов и полимеразной цепной реакции. Сущность методов: в лаборатории имеется исходное генетическое строение бактерии туберкулеза. Данный материал лаборанты встраивают в бактерии; если он подходит, тогда идет интенсивное размножение возбудителя, если нет, он отторгается.

ПЦР (полимеразная цепная реакция) в настоящее время является одним из самых современных, быстрых и точных методом диагностики различных инфекций.

Высокая специфичность ПЦР характеризуется тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, присущий только данному возбудителю фрагмент ДНК.

Метод ПЦР позволяет наблюдать даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР помогает выявить возбудителей инфекций даже в тех случаях, когда другими видами анализов (бактериологическими, иммунологическими, микроскопическими) это провести не представляется возможным. Применение ПЦР весьма эффективно в отношении инфекционных возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Надежность метода составляет 99,9 %.

Изучение грибковой флоры в мокроте. Иногда в неокрашенном или окрашенном препарате мокроты можно встретить различные виды грибов. Это могут быть дрожжевые грибы рода кандида, представленные в мазке в виде почкующихся клеток и коротких отпочкованных нитей (клетки округлой формы, нити ветвистой формы с находящимися на них спорами). Присутствие грибов рода кандида говорит об их активном размножении, но не позволяет поставить диагноз кандидомикоза (вызываемое ими заболевание). Наличие кандид может говорить не только о кандидозе (молочница), но и наблюдаться как временное явление после приема антибиотиков, угнетения иммунитета под влиянием различных факторов (лучевая, химиотерапия, ВИЧ/СПИД, прием гормонов и т. д.). Необходимо сделать ряд повторных исследований с учетом жалоб и состояния обследуемого. Дрожжевой гриб, вызывающий тяжелое заболевание криптококкоз, имеет вид круглых, почкующихся клеток с толстыми двойными стенками. Плесневый гриб (вызывает заболевание аспергиллез) состоит из обрывков широких нитей и круглых темно-зеленых спор. Лучистый грибок актиномицет обнаруживается в мокроте при поражении легких актиномикозом. Для его обнаружения в мокроте ищут мельчайшие сероватые или желтоватые зернышки, представляющие друзы (тело) грибка, и исследуют под микроскопом. При большом увеличении центр друзы состоит из густо переплетающихся нитей, а периферия – из булавовидных образований с расширениями на концах, сильно преломляющими свет (отсюда название «лучистый»). При окрашивании по Граму тело гриба окрашивается в синий цвет, а расширения – в розовый; при окраске по Цилю – Нильсену булавовидные утолщения приобретают красный цвет. Важным разделом исследования мокроты является определение ее химической реакции. Для определения реакции мокроты необходимо приложить к ней смоченные дистиллированной водой полоски синей и красной лакмусовой бумажки. При нейтральной реакции (pH 6,8–7,6) мокроты цвет бумажки не изменяется; при кислой реакции (pH 5,5–6,7) приобретает красный цвет синяя бумажка, а красная не меняется; при щелочной реакции (pH 8,0–8,5) красная бумажка синеет, а синяя не меняется. В настоящее время многие лаборатории используют экспресс-методы определения реакции мокроты с помощью специальных диагностических тест-полосок (чаще всего это полоски фирмы «Сенсор»).